[发明专利]用于大规模种植的白木香组织培养方法

权利要求书

1.用于大规模种植的白木香组织培养方法，包括无菌苗培养、芽诱导及芽增殖、生根壮苗培养和炼苗移栽，其特征在于：所述的无菌苗培养步骤包括将白木香种子胚先用无菌水清洗，再用70~80%酒精漂洗，无菌水清洗后再放入10~18%次氯酸钠中浸泡，再用无菌水清洗，并放入种子萌发培养基中。种子消毒较容易，污染率低，直接取白木香腋芽作为外植体消毒较困难，污染率高；选取无菌苗的顶芽为外植体缩短了丛生芽的诱导时间；子叶和不带芽的茎段只能诱导出大量的愈伤组织，所以外植体选为无菌苗顶芽。

2.根据权利要求1所述的用于大规模种植的白木香组织培养方法，其特征在于：所述的种子萌发培养基为添加了0.7~1.5mg/L的GA₃的MS培养基。

3.根据权利要求1所述的用于大规模种植的白木香组织培养方法，其特征在于：所述的芽诱导和芽增殖步骤包括去除将幼苗子叶去掉，留下顶芽转接到添加0.7~1.5mg/L6-BA、0.07~0.15mg/LNAA、0.4~0.6mg/LKT和活性短肽的MS培养基，即芽诱导培养基中培养，形成丛生芽。

4.根据权利要求3所述的用于大规模种植的白木香组织培养方法，其特征在于：所述的活性短肽的氨基酸序列为SCASVCKSHRARRCGSVFRCYCRCLRC。

5.根据权利要求1所述的用于大规模种植的白木香组织培养方法，其特征在于：所述的芽诱导和芽增殖步骤包括将丛生芽转入添加0.04~0.06mg/LBAP、27~34g/L蔗糖、0.07~0.14g/L肌醇和6~9g/L琼脂的MS培养基中继代培养，得到无根苗丛，将苗丛的无根苗从基部切割，并切成0.4~0.7cm长的小段，再将小段和切割后剩下的苗丛分别转入芽诱导培养基中培养，形成丛生芽，重复上述步骤得到大量的丛生芽和无根苗。

6.根据权利要求1所述的用于大规模种植的白木香组织培养方法，其特征在于：所述的生根壮苗培养步骤为先将无根苗转移到添加0.8~1.5mg/LIBA和0.4~0.6mg/LNAA的1/2MS培养基中培养1~3d，再转入无生长素的1/2MS培养基中间接诱根产生。无根苗在生长素作用下形成较多的根原基，在无生长素的抑制作用下让根伸长并正常生长，从而解决了根原基的发生和根伸长之间的矛盾，并减少了愈伤组织的形成。采用上述方法诱导白木香外植体生根，不仅生根率较高，而且生根苗基部无愈伤组织，根系生长良好。

7.根据权利要求1所述的用于大规模种植的白木香组织培养方法，其特征在于：所述的炼苗移栽步骤包括待生根的试管苗长至3~5cm高时，将试管苗置窗前散射光处3~5d再打开封口膜炼苗2~3d，接着从瓶中取出试管苗，用清水洗净粘附根系的培养液，转入到珍珠岩的基质中，淋足定根水，套上带小孔的塑料袋保湿防风，20~30d后移去塑料套，之后每隔1~2d喷水一次。