[发明专利]用于大规模种植的白木香组织培养方法

说明书

技术领域

本发明涉及植物组织培养技术领域，具体是一种用于大规模种植的白木香组织培养方法。

背景技术

白木香(Aquilaria sinensis)，又名莞香、女儿香、土沉香，为瑞香科(Thmelaceae)植物。白木香树为多年生常绿的木本植物，是香料及药用植物，也是我国唯一能够生产沉香的植物资源。野生资源主要分布在广西省、海南省和福建省等省市，有少部分分布在云南的西双版纳和思茅等地区。白木香树是一种名贵的药材，高级的香料，随着国际市场需求数量的增大，其价格也不断的上涨。上等沉香药材价格每公斤高达万元之上，使其在市场上供不应求。白木香其味辛、苦，性温，具纳气平喘、有止痛止吐的功效，主要用于治疗胃寒呕吐、肾虚气喘、胸腹涨闷疼痛。由此带来的过度伐木和采香，使得土沉香资源面临灭绝，白木香树1987年被评为国家珍稀濒危三级保护植物，其次1999年又被国家批准为国务院二级重点保护野生植物。

白木香树是属于自然野生树种，繁殖方式主要是通过种子繁殖，但目前野生成年的母树已经极其稀少，无法产生大量的种子，造成大面积推广种植较困难;而且种子繁殖的种苗较容易产生变异，难保留良种优势。

植物组织培养是一种将植物体的部分细胞或组织与母体分离，在适当的条件下加以培养，使它们能够生长、发育、分化与增殖的技术。原理是来自植物细胞的全能性分化能力，也就是植物体内的某一类细胞，能够独立发育并且分化成为完整的植物成体。植物组织培养能够以少量的母体培养出大量的植物，这使植物组织培养有许多的用途，例如基础植物学与遗传学研究，以及农业上的育种与品种保留。

现有技术如授权公告号为CN 104686341 B的中国发明专利，公开了一种白木香的组织培养技术，涉及白木香（Aquilaria sinensis）通过离体快繁技术获得优质种苗的育苗方法。该方法以白木香带芽茎段为外植体，经过外植体消毒、丛生芽诱导、生根培养、炼苗移栽等过程从而建立了白木香组织培养快速繁殖体系，加速白木香良种的推广和资源开发利用具有重要的现实意义。但上述方法中丛生芽的量少，长出的丛生芽颜色偏黄，生命力不旺盛。

发明内容

本发明的目的在于提供一种丛生芽的量多，得到的丛生芽叶大而绿，生命力旺盛的用于大规模种植的白木香组织培养方法。

本发明针对背景技术中提到的问题，采取的技术方案为：用于大规模种植的白木香组织培养方法，包括无菌苗培养、芽诱导及芽增殖、生根壮苗培养和炼苗移栽。无菌苗培养步骤包括将白木香种子胚先用无菌水清洗，再用70~80%酒精漂洗，无菌水清洗后再放入10~18%次氯酸钠中浸泡，再用无菌水清洗，并放入种子萌发培养基中。种子萌发培养基为添加了0.7~1.5mg/L的GA₃的MS培养基。种子消毒较容易，污染率低，直接取白木香腋芽作为外植体消毒较困难，污染率高。

芽诱导和芽增殖步骤包括去除将幼苗子叶去掉，留下顶芽转接到添加0.7~1.5mg/L6-BA、0.07~0.15mg/LNAA、0.4~0.6mg/LKT和活性短肽的MS培养基，即芽诱导培养基中培养，形成丛生芽。选取无菌苗的顶芽为外植体缩短了丛生芽的诱导时间；子叶和不带芽的茎段只能诱导出大量的愈伤组织，所以外植体选为无菌苗顶芽。上述方法培育的丛生芽的量多，得到的丛生芽叶大而绿，生命力旺盛。

活性短肽的氨基酸序列为SCASVCKSHRARRCGSVFRCYCRCLRC。上述活性短肽可明显提高分化后细胞的增殖速度，得到的丛生芽的量多，叶大而绿，生命力旺盛。

芽诱导和芽增殖步骤包括将丛生芽转入添加0.04~0.06mg/LBAP、27~34g/L蔗糖、0.07~0.14g/L肌醇和6~9g/L琼脂的MS培养基中继代培养，得到无根苗丛，将苗丛的无根苗从基部切割，并切成0.4~0.7cm长的小段，再将小段和切割后剩下的苗丛分别转入芽诱导培养基中培养，形成丛生芽，重复上述步骤得到大量的丛生芽和无根苗。

生根壮苗培养步骤为先将无根苗转移到添加0.8~1.5mg/LIBA和0.4~0.6mg/LNAA的1/2MS培养基中培养1~3d，再转入无生长素的1/2MS培养基中间接诱根产生。无根苗在生长素作用下形成较多的根原基，在无生长素的抑制作用下让根伸长并正常生长，从而解决了根原基的发生和根伸长之间的矛盾，并减少了愈伤组织的形成。采用上述方法诱导白木香外植体生根，不仅生根率较高，而且生根苗基部无愈伤组织，根系生长良好。