[发明专利]一种可编程的多位点特异性的转录抑制系统及其应用

权利要求书

1.一种可编程的多位点特异性的转录抑制系统，包括如下(A)和(B)：

(A)位点特异性转录抑制蛋白，或者能够表达所述位点特异性转录抑制蛋白的DNA环状质粒或DNA线性片段或体外转录的RNA或mRNA；

所述位点特异性转录抑制蛋白为将来自于弗朗西斯菌(Francisella novicida)U112的Cpf1蛋白的第917位氨基酸由天冬氨酸突变为丙氨酸后得到的蛋白；

(B)靶向多个位点的可编程sgRNA，或者能够转录所述靶向多个位点的可编程sgRNA的DNA环状质粒或DNA线性片段；

所述靶向多个位点的可编程sgRNA，由19-36nt的重复序列以及可变的16-31nt的间隔序列自5’端到3’端依次交替排列构成。

2.根据权利要求1所述的转录抑制系统，其特征在于：所述转录抑制系统为如下(a)或(b)或(c)：

(a)由所述位点特异性转录抑制蛋白和所述靶向多个位点的可编程sgRNA组成；

(b)由既能够表达所述位点特异性转录抑制蛋白也能够转录所述靶向多个位点的可编程sgRNA的DNA环状质粒或DNA线性片段组成；

(c)由能够表达所述位点特异性转录抑制蛋白的DNA环状质粒或DNA线性片段或体外转录的RNA或mRNA，以及能够转录所述靶向多个位点的可编程sgRNA的DNA环状质粒或DNA线性片段组成。

3.根据权利要求1或2所述的转录抑制系统，其特征在于：所述靶向多个位点的可编程sgRNA中，所述重复序列的长度为19nt；和/或

所述靶向多个位点的可编程sgRNA中，所述间隔序列的长度为18-20nt。

4.根据权利要求1-3中任一所述的转录抑制系统，其特征在于：所述靶向多个位点的可编程sgRNA中，所述重复序列为来自于弗朗西斯菌(Francisella novicida)U112的sgRNA的重复序列。

5.根据权利要求1-4中任一所述的转录抑制系统，其特征在于：所述位点特异性转录抑制蛋白的氨基酸序列如序列表中序列1所示。

6.根据权利要求1-5中任一所述的转录抑制系统，其特征在于：所述靶向多个位点的可编程sgRNA中，所述重复序列为至少含有序列表中序列2自3’末端起的19个核苷酸，并且从序列2自3’末端起的第20个核苷酸起沿着序列2向5’端延长，得到的长度为19-36nt的单链RNA。

7.权利要求1-6中任一所述的转录抑制系统在抑制目的基因转录中的应用。

8.根据权利要求7所述的应用，其特征在于：利用所述转录抑制系统抑制所述目的基因转录的过程中，以所述目的基因中符合如下条件的序列作为PAM序列：3’末端的碱基为A或C或G，5’端富含碱基T的序列。

9.根据权利要求8所述的应用，其特征在于：所述PAM序列为5′-TTTTTV-3′、5′-TTTTV-3′或5′-TTTV-3′；其中，V为A或C或G。

10.CRISPR-Cpf1系统在制备用于抑制靶标基因转录的系统中的应用；所述CRISPR-Cpf1系统中的Cpf1蛋白为将来自于弗朗西斯菌(Francisella novicida)U112的Cpf1蛋白的第917位氨基酸由天冬氨酸突变为丙氨酸后得到的蛋白。