[发明专利]丹参组织培养中无根苗生根培养工艺

说明书

技术领域

本发明涉及一种丹参组织培养中无根苗生根培养工艺。

背景技术

丹参(Salvia miltiorrhiza Bunge)是是唇形科鼠尾草属多年生草本植物，又名红根、紫丹参、大红袍等。是我国传统常用药和多种中成药的主要原料。以干燥的根或根茎入药，具有活血调经，消炎止痛，养血安神等功效。其主要有效成分为二貼醌类和芬酸类。作为传统中药，丹参在我国栽培历史悠久，近年来丹参的需求量剧增，而传统的繁殖方式即种子繁殖和分根繁殖都具有一定的缺陷，导致现如今丹参产量减少，品种退化，且容易受气候环境的影响。而近年来兴起的植物组织培养技术，不仅可以保持母本植株的优良性状，且不受气候环境的影响就可达到高繁殖倍数。

植物组织培养是根据细胞的全能性理论，利用植物体离体的器官(如根、茎、叶等)、组织(如形成层、表皮、胚乳等)或细胞(如大孢子、小孢子、体细胞等)以及原生质层，在无菌和适宜的人工条件下，诱导出愈伤组织、不定芽、不定根，最后形成完整植株。

近年来，植物组织培养技术已成为丹参繁殖的重要手段。在整个丹参植物组织培养过程中中，丹参苗生根的状况直接决定着组培苗出瓶的存活率。因此对丹参无根苗生根工艺的优化具有重要意义。

发明内容

针对上述存在的问题，本发明旨在提供丹参组织培养中无根苗生根培养工艺，该工艺主要对丹参无根苗培养过程中的培养基成分进行优化和改进，只添加一种激素IBA(浓度为0.2mg/L)，就可以达到最佳的生根效果，通过优化后的工艺，不仅减少的实验步骤，又节省了实验成本。

为了实现上述目的，本发明所采用的技术方案如下：

丹参组织培养中无根苗生根培养工艺，包括以下步骤：

1)培养基的配制

a、激素母液的配制：称取IBA 0.1g，用5mL 1M NaOH引溶，再用纯水定容至100mL，即为浓度为1.0mg/mL的IBA母液；

b、激素抽滤灭菌：将滤膜放进抽滤头，高压灭菌，带进超净台，将IBA母液抽滤灭菌，备用；

c、配制培养基基本成分：1/2MS+30g/L蔗糖+5.26g/L琼脂，pH5.8；高压灭菌；带入超净台备用；

d、添加激素：在超净台上用无菌的移液抢吸取IBA加入到基本培养基里，使其浓度为0.2mg/L，混匀；

e、分装：将添加好激素的培养基分装到无菌的组培瓶中，每瓶30～40mL，培养基成分为：1/2MS+0.2mg/L IBA+30g/L蔗糖+5.26g/L琼脂，pH5.8；

2)丹参苗的选择；

3)丹参苗的处理：先无菌处理再进行修剪，修剪前剪切装置进行无菌处理；

4)丹参茎段的接种；

5)丹参苗的生根培养：接种后的茎段放置于组培室的组培架上进行生根的诱导，培养条件：培养温度27±0.5℃，光照时间12h，光强3000Lx，T5植物培养灯管。

作为优选，所述步骤(2)“丹参苗的选择”是选择粗壮无污染的丹参组培无根苗为材料，带入超净台备用，并用75％酒精棉球擦拭瓶口处。

作为优选，所述步骤(3)“丹参苗的处理”是用无菌的镊子将生长良好的丹参苗镊起，置于无菌的接种盘上，用无菌的剪切装置减去多余叶片，将茎段剪成具有一个生长点的小段。

作为优选，所述步骤(4)“丹参茎段的接种”是用无菌的镊子将剪好的茎段镊起，置于步骤(1)“分装”的固体培养基上。

本发明的有益效果是：在现代丹参植物组织培养过程中，诱导丹参无根苗生根通常以MS为基本培养基，添加6-BA、NAA、IBA、IAA几种激素混合使用。一般来说适量浓度的NAA、IBA、IBA都会诱导植物生根，而6-BA作为植物生长调节剂，不仅可以促进细胞分化，还会抑制或促进根系的生长，一般都以NAA、IBA、IAA其中一种激素搭配使用6-BA诱导植物生根。而本发明以1/2MS为基本培养基，只单独使用IBA一种激素就可以诱导丹参无根苗生根，且生根启动周期短，根系发达，数量多，整株丹参苗生长旺盛。

具体实施方式

为了使本领域的普通技术人员能更好的理解本发明的技术方案，下面结合实施例对本发明的技术方案做进一步的描述。

实施例：丹参组织培养中无根苗生根培养工艺，包括以下步骤：

1)培养基的配制