[发明专利]一种从虎杖中提取虎杖苷和白藜芦醇的HPLC检测方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种同时测定虎杖苷和白藜芦醇含量测定方法的建立，属于化学药物分析技术领域，其建立的方法应用于虎杖提取工艺优化结果成分分析，比较得出虎杖苷和白藜芦醇含量的HPLC测定方法。

背景技术

虎杖是蓼科植物虎杖Polygonum cuspidatum Sieb.Et.Zucc.的干燥根茎及根，性微寒、味微苦，具利胆退黄、清热解毒、散瘀止痛、化痰止咳等功效。虎杖含蒽醌、二苯乙烯类、酚类、黄酮类等多种成分，其中二苯乙烯类主要为白藜芦醇和虎杖苷，蒽醌类主要以大黄素、大黄素甲醚为代表，也含有多种蒽醌苷。

《中华人民共和国药典》2010年版仅以大黄素和虎杖苷作为虎杖含量测定的指标物，而未涉及白藜芦醇。然而白藜芦醇在虎杖中含量相对较高，是一类有特殊的医疗保健功能、对人体健康有着显著作用的多酚物质。白藜芦醇是一种极有前途的药物中间体，对肿瘤具有化学预防作用，而且对癌细胞具有选择性杀伤力；对治疗心脑血管疾病有很好的疗效，且毒副性很小，便于长期服用。

但如何通过虎杖苷和白藜芦醇HPLC检测方法的建立，并采用所建立的方法对虎杖提取工艺优化结果进行测定，是本领域技术人员急需解决的技术难题。

发明内容

本发明的目的是提供一种从虎杖中提取虎杖苷和白藜芦醇的HPLC检测方法，并采用所建立的方法对虎杖提取工艺优化结果进行测定，为虎杖资源全利用提供参考，并为其他基质的虎杖苷和白藜芦醇检测提供参考。

为了实现上述目的，本发明采取的技术方案如下：

一种从虎杖中提取虎杖苷和白藜芦醇的HPLC检测方法，高效液相色谱分析的条件包括：采用反相填料色谱柱；检测波长为306nm以及全波长扫描，流速为0.8～1.2ml/min，进样量为2～20μl，柱温为25～35℃，流动相为乙腈-水、甲醇-0.1％甲酸水、乙腈-0.1％甲酸水、甲醇-水、甲醇-0.1％磷酸水、乙腈-0.1％磷酸水，等度洗脱。

一种从虎杖中提取虎杖苷和白藜芦醇的HPLC检测方法，高效液相色谱分析的条件为：采用Phenomenex5μm EVO C18(250mm×4.6mm，5μm)色谱柱，采用波长为306nm，流速为1.0ml/min，进样量为10μl，柱温为25℃，分析时间为40min，流动相为乙腈-水(23:77)，等度洗脱。

一种从虎杖中提取虎杖苷和白藜芦醇的HPLC检测方法，前处理方法考察对象有：提取溶剂(无水乙醇、甲醇、乙酸乙酯、稀乙醇)；提取方法(超声提取、加热回流、冷浸)；提取固料比(1:10～1:100)；提取溶剂体积分数(30％、50％、75％、95％、100％)；提取时间(30min、60min、90min)。

一种从虎杖中提取白藜芦醇的HPLC检测方法，前处理方法为：取虎杖药材粉末(过三号筛)约0.5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入50％乙醇20mL；密塞，加热回流30分钟，取出，放冷至室温后，用甲醇补回失去的重量。过滤，取续滤液，即得。

根据实际生产条件和经济效应，对虎杖纤维素酶酶解提取工艺进行优化包括：酶解液pH值、酶解温度、酶解时间。

根据实际生产条件和经济效应，对虎杖纤维素酶酶解提取工艺最佳为：酶解液pH7.5、酶解温度55℃、酶解时间6小时。

一种从虎杖中检测白藜芦醇含量的HPLC测定方法，对虎杖纤维素酶酶解提取工艺优化结果成分进行测定。

与现有技术相比，本发明具有如下优点和有益效果：

本发明提供一种实用性强、稳定可靠、重现性好的同时测定虎杖苷和白藜芦醇的HPLC检测方法，为虎杖工艺优化结果成分虎杖苷和白藜芦醇进行测定，并通过提取工艺的考察，同时以虎杖苷、白藜芦醇为指标成分优选最佳提取工艺。

附图说明

图1a和1b分别为虎杖苷和白藜芦醇的全波长扫描图谱；图1c和1d分别为对照品(虎杖供试品色谱图(306nm))和供试品溶液(虎杖供试品色谱图)扫描图谱(DAD全波长扫描)；

图2a、2b和2c分别为流动相为乙腈-水的对照品(虎杖苷对照品图谱(乙腈-水)、白藜芦醇对照品图谱(乙腈-水))和供试品(虎杖供试品溶液图谱(乙腈-水))图谱；

图3a和3b分别为虎杖苷和白藜芦醇的标准曲线图；

图4是不同进样量图谱；

图5是不同柱温考察图谱；

图6是不同提取方法图谱；

图7是固料比考察图谱；

图8是不同体积分数色谱图；

图9是不同提取时间图谱。

具体实施方式