[发明专利]一种表达葡萄糖氧化酶的低聚果糖合成工程菌株及其构建方法与应用

权利要求书

1.一种表达葡萄糖氧化酶的低聚果糖合成工程菌发酵生产低聚果糖的方法，步骤是：

（1）构建表达葡萄糖氧化酶的低聚果糖合成工程菌，步骤是：将葡萄糖氧化酶GOX编码基因gox与β-呋喃果糖苷酶FopA-C端结构域编码基因fopA-C融合获得融合基因gox-fopA-C，再与启动子PgpdA、终止子TtrpC连接形成融合基因gox-fopA-C表达盒；将该表达盒与pMD19-T载体连接，得到融合基因表达载体pGOC；再将该载体转化进入黑曲霉ATCC 20611的基因组，即获得表达葡萄糖氧化酶的低聚果糖合成工程菌株；其中，所述表达葡萄糖氧化酶的低聚果糖合成工程菌株是基因组中含有融合基因gox-fopA-C的工程菌；该工程菌株的出发菌是黑曲霉ATCC 20611；所述融合基因gox-fopA-C是葡萄糖氧化酶GOX编码基因gox与β-呋喃果糖苷酶FopA的C端结构域编码基因fopA-C融合获得，该融合基因gox-fopA-C的核苷酸序列如SEQ ID No.1所示，其上游为构巢曲霉的三磷酸甘油醛脱氢酶启动子PgpdA，下游为构巢曲霉色氨酸终止子TtrpC，其中所述的葡萄糖氧化酶GOX编码基因gox来自黑曲霉ATCC1015基因组；所述的β-呋喃果糖苷酶FopA的C端结构域编码基因fopA-C来自黑曲霉ATCC20611基因组，所述的启动子PgpdA和终止子TtrpC基因来源于质粒pAN7-1；

（2）将表达葡萄糖氧化酶的低聚果糖合成工程菌以1×10⁶ 个/mL孢子量接种到发酵培养基中，培养温度为30℃，转速为200 r/min，培养时间为48 h，收集菌丝体；

（3）测定菌丝体的β-呋喃果糖苷酶活力，获得每克菌丝体与β-呋喃果糖苷酶活力单位的关系值，进行低聚果糖的制备；其中低聚果糖制备的反应体系为：蔗糖浓度为400 g/L，CaCO3质量体积比为1.0%，菌丝体量为6 U β-呋喃果糖苷酶活力/g蔗糖，温度为40℃，转速为150 r/min，反应时间为20 h。