[发明专利]腹泻相关病毒多重基因检测体系及其试剂盒和应用

权利要求书

1.一种腹泻相关病毒多重基因检测产品，其特征在于：包括分别针对人星状病毒、诺如病毒II、人肠道腺病毒、轮状病毒A、轮状病毒B和轮状病毒C进行检测的正反向PCR扩增引物；

针对人星状病毒的正向引物的核苷酸序列如SEQ ID No.27所示，针对人星状病毒的反向引物的核苷酸序列如SEQ ID No.28所示；

针对诺如病毒II的正向引物的核苷酸序列如SEQ ID No.29所示，针对诺如病毒II的反向引物的核苷酸序列如SEQ ID No.30所示；

针对人肠道腺病毒的正向引物的核苷酸序列如SEQ ID No.31所示，针对人肠道腺病毒的反向引物的核苷酸序列如SEQ ID No.32所示；

针对轮状病毒A的正向引物的核苷酸序列如SEQ ID No.33所示，针对轮状病毒A的反向引物的核苷酸序列如SEQ ID No.34所示；

针对轮状病毒B的正向引物的核苷酸序列如SEQ ID No.35所示，针对轮状病毒B的反向引物的核苷酸序列如SEQ ID No.36所示；

针对轮状病毒C的正向引物的核苷酸序列如SEQ ID No.37所示，针对轮状病毒C的反向引物的核苷酸序列如SEQ ID No.38所示。

2.根据权利要求1所述的腹泻相关病毒多重基因检测产品，其特征在于：还包括针对人RNA内参、人DNA内参、系统质控内参进行检测的正反向PCR扩增引物；所述人RNA内参是B2M，所述人DNA内参是RNaseP，所述系统质控内参是含有卡那霉素抗性基因的质粒；

针对人RNA内参的正向引物的核苷酸序列如SEQ ID No.39所示，针对人RNA内参的反向引物的核苷酸序列如SEQ ID No.40所示；

针对人DNA内参的正向引物的核苷酸序列如SEQ ID No.41所示，针对人DNA内参的反向引物的核苷酸序列如SEQ ID No.42所示；

针对系统质控内参的正向引物的核苷酸序列如SEQ ID No.43所示，针对系统质控内参的反向引物的核苷酸序列如SEQ ID No.44所示。

3.根据权利要求1所述的腹泻相关病毒多重基因检测产品，其特征在于：所述针对轮状病毒B的正向引物在检测体系中的终浓度为200nM；所述针对诺如病毒II、轮状病毒C的正向引物在检测体系中的终浓度均为100nM，所述针对人星状病毒的正向引物在检测体系中的终浓度为300nM，所述针对人肠道腺病毒的正向引物在检测体系中的终浓度为450nM，所述针对轮状病毒A的正向引物在检测体系中的终浓度为400nM；

所述针对人肠道腺病毒、轮状病毒B、轮状病毒C的反向引物在检测体系中的终浓度均为100nM，所述针对人星状病毒、诺如病毒II的反向引物在检测体系中的终浓度均为400nM，所述针对轮状病毒A的反向引物在检测体系中的终浓度为450nM；

针对人RNA内参、人DNA内参、和系统质控内参的正反向引物在检测体系中的终浓度均为1μM。

4.根据权利要求1至3中任一项所述的腹泻相关病毒多重基因检测产品，其特征在于：还包括PCR缓冲液，MgCl₂溶液，dNTPs，以及热启动DNA聚合酶和逆转录酶混合液。

5.根据权利要求1至3中任一项所述的腹泻相关病毒多重基因检测产品，其特征在于：还包括荧光标记，所述荧光标记为CY5或CY3或FAM。

6.根据权利要求1至3中任一项所述的腹泻相关病毒多重基因检测产品，其特征在于：还包括阳性对照物和阴性对照物；所述阳性对照物是包括所有目的基因靶点的质粒混合物；所述阴性对照物是无核酸酶超纯水。

7.根据权利要求6所述的腹泻相关病毒多重基因检测产品，其特征在于：反应时体系中的组分用量为5×的PCR缓冲液2体积， 10μM的dNTPs共0.35体积，25mmol/L的MgCl₂溶液0.25体积，引物混合物1体积，5U/μL的热启动DNA聚合酶和5U/μL的逆转录酶混合液0.4体积，1U/μL的UDG酶0.1体积，DNA模板2.5体积，纯水2.5体积；所述DNA模板的使用量为5～50ng/体系。