[发明专利]一种酶法高效制备角膜脱细胞基质组织工程支架的方法

说明书

一种酶法高效制备角膜脱细胞基质组织工程支架的方法，步骤如下：(1)将猪角膜基质板层置于稀释的Myroilysin中，进行脱细胞处理，然后生理盐水、蒸馏水分别冲洗，制得猪角膜脱细胞支架板层；(2)将猪角膜脱细胞支架放置在钻台上，滴加核黄素溶液，并在紫外灯下照射，然后生理盐水、蒸馏水分别冲洗，制成核黄素交联的猪角膜脱细胞支架；(3)将步骤(2)制得的交联的猪角膜脱细胞支架经脱水、灭菌，4℃保存待用。本发明制得的脱细胞支架仍保留足够的机械强度，并且形成了一定的孔隙，脱水后透明度较高，有利于细胞的生长和迁移。

技术领域

本发明涉及一种酶法高效制备角膜脱细胞基质组织工程支架的方法，属于生物技术领域。

背景技术

角膜疾病的致盲率在眼科疾病中占据第二位，我国每年也有数百万角膜盲患者。角膜病的早期治疗方法主要根据病因来对症治疗，晚期时，由于角膜多出现瘢痕、溃疡等，需要手术替换病变角膜，即角膜移植术。角膜移植术是治疗角膜盲最重要的方法。我国每年有数百万角膜盲患者，其中大部分患者更可以通过角膜移植术脱盲。角膜移植术的供体角膜绝大多数为人源角膜，因此数量极其有限，最终每年可以通过异体角膜移植术重见光明患者的只有数千例。这种情况下，替代材料的发展成为了角膜盲患者康复的希望，因而研究能够替代角膜的组织工程材料成为一种迫切的需求。

角膜基质层是构成角膜的主要部分，占角膜厚度的90％，主要成分为角膜基质细胞、胶原、糖蛋白和蛋白多糖。正常的角膜基质由200-250层胶原纤维板构成，交错排列，其中构成角膜纤维板层的胶原纤维相互平行排列，直径一致，集中分布于30nm附近，间距相等。角膜基质特征性组织学结构与角膜透明性状密切相关，是其他组织所不能替代的。因此，角膜基质组织的构建是组织工程技术构建角膜的主要任务、难点和关键所在。组织工程角膜载体材料需要有良好的三维立体结构和功能蛋白以支持种子细胞的生长，一定的机械强度，较好的透光度、屈光度、透氧性，以及良好的生物可降解性等等。角膜组织工程材料主要包括天然材料，人工材料及复合材料。天然材料包括羊膜，壳聚糖，胶原，异种角膜基质等。人工材料是人工合成的高分子物质，包括聚羟基乙酸，合成胶原等，但由于非酶性水解，未知的体内代谢过程及产物，作为角膜组织工程的支架材料，仍需进行深入的研究。另外，人工材料通常在曲率，透明度，机械强度，密度，孔隙率等性质上与天然角膜有一定差异。引用两种或两种以上的材料，通过不同的配比、合成方法等调节材料的性质，制成是复合材料。但在复合材料中，各部分的比例，混合方法，材料的具体物理、化学及生物学性质等，还需要进一步研究。因此，由于角膜组织结构的复杂性，人工和复合材料材料很难满足角膜移植后组织层次的正常重建。