[发明专利]一种治疗HIV感染的嵌合抗原受体的重组基因构建及其应用

权利要求书

1.一种治疗HIV感染的嵌合型抗原受体N6-CAR，其特征在于：该嵌合型抗原受体是通过N端到C端顺次拼接信号肽、单链抗体ScFv、CD8hinge、白细胞抗原分化群分子跨膜区CD28-TM及其细胞内结构域(ICD)、4-1BB和白细胞抗原分化群3的ζ链CD3得到的，所得到的嵌合型抗原受体的氨基酸序列如SEQ ID NO.4所示；所述单链抗体ScFv能够识别HIV病毒感染细胞表面的gp120，是通过串联针对HIV病毒感染细胞表面的gp120的抗体轻链、重链可变区而得，单链抗体ScFv作为整个CAR分子的胞外结合结构域，其氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示。

2.根据权利要求1所述的一种治疗HIV感染的嵌合型抗原受体N6-CAR，其特征在于：编码单链抗体ScFv基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。

3.编码权利要求1所述的嵌合型抗原受体的基因，其特征在于：其核苷酸序列如SEQ IDNO.3所示。

4.一种含有并能表达氨基酸序列为SEQ ID NO.4所示的嵌合型抗原受体的编码基因的表达载体，其特征在于：所述载体为以PTK881载体为骨架，将CMV启动子替换成EF-1α启动子后改造成的PTK-EF1α-N6载体，其核苷酸序列如SEQ ID NO.5所示。

5.一种基因修饰的CD8⁺T淋巴细胞，其特征在于：是将权利要求4所述的PTK-EF1α-N6表达载体转染293T细胞所得的慢病毒载体转导CD8⁺T淋巴细胞，从而获得的能表达权利要求1所述的嵌合型抗原受体的基因工程化的T-淋巴细胞。

6.根据权利要求5所述的基因修饰的CD8⁺T细胞，其特征在于：由以下方法制备得到：从外周血分离PBMC后再用磁珠阳选获得CD8⁺T细胞，经anti-CD3/28磁珠(细胞与磁珠比例为1:3)刺激12小时后，加入重组有权利要求1-2任一所述嵌合型抗原受体N6-CAR分子的慢病毒感染4小时后补液(MOI＝5)，从病毒感染后第三天开始，细胞计数并根据细胞状态和增殖情况补加培养基，细胞浓度调整至0.6x10⁶/ml，并补充IL-2100U/mL，进一步扩增细胞直到满足回输的细胞数。

7.一种如权利要求5-6任一所述的基因修饰的CD8⁺T淋巴细胞的用途，其特征在于：所述基因修饰的CD8⁺T淋巴细胞应用于制备抗HIV感染的活细胞药物。