[发明专利]一种检测肺癌相关基因热点突变的试剂盒及其应用

权利要求书

1.引物对组和记载有“检测待测者的肺癌相关基因是否发生突变的方法”的可读性载体在制备用于检测肺癌相关基因突变的试剂盒中的应用；

所述肺癌相关基因为ALK基因、BRAF基因、EGFR基因和KRAS基因；

所述引物对组由（1）-（4）所示的特异于ALK基因的4个引物对、（5）所示的特异于BRAF基因的1个引物对、（6）-（12）所示的特异于EGFR基因的7个引物对和（13）-（14）所示的特异于KRAS基因的2个引物对组成；

（1）由序列表中序列1和序列2所示的两个单链DNA组成的引物对1；

（2）由序列表中序列3和序列4所示的两个单链DNA组成的引物对2；

（3）由序列表中序列5和序列6所示的两个单链DNA组成的引物对3；

（4）由序列表中序列7和序列8所示的两个单链DNA组成的引物对4；

（5）由序列表中序列9和序列10所示的两个单链DNA组成的引物对5；

（6）由序列表中序列11和序列12所示的两个单链DNA组成的引物对6；

（7）由序列表中序列13和序列14所示的两个单链DNA组成的引物对7；

（8）由序列表中序列15和序列16所示的两个单链DNA组成的引物对8；

（9）由序列表中序列17和序列18所示的两个单链DNA组成的引物对9；

（10）由序列表中序列19和序列20所示的两个单链DNA组成的引物对10；

（11）由序列表中序列21和序列22所示的两个单链DNA组成的引物对11；

（12）由序列表中序列23和序列24所示的两个单链DNA组成的引物对12；

（13）由序列表中序列25和序列26所示的两个单链DNA组成的引物对13；

（14）由序列表中序列27和序列28所示的两个单链DNA组成的引物对14；

所述检测待测者的肺癌相关基因是否发生突变的方法，包括如下步骤：

（a）从待测者的血浆样本中提取游离核酸为模板，以所述引物对组中的各引物进行PCR扩增，得到扩增产物；

（b）对所述扩增产物进行磁珠纯化回收，得到回收产物1；

（c）对所述回收产物1进行PCR富集，得到富集产物；

（d）对所述富集产物进行磁珠纯化回收，得到回收产物2；

（e）对所述回收产物2进行高通量测序，根据测序结果确定所述待测者的肺癌相关基因是否发生突变；

在所述检测待测者的肺癌相关基因是否发生突变的方法中，步骤（a）中进行所述PCR扩增时，所述引物对组中的各引物对被分在两组分别进行多重PCR扩增；其中一组中的引物有所述引物对1、所述引物对3、所述引物对5、所述引物对7、所述引物对9、所述引物对11和所述引物对13，另一组中的引物有所述引物对2、所述引物对4、所述引物对6、所述引物对8、所述引物对10、所述引物对12和所述引物对14；

两组多重PCR反应的反应体系，各引物均为等摩尔使用；

两组多重PCR反应的反应程序，退火温度均为65℃。

2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于：所述高通量测序为Illumina测序。

3.一种用于检测肺癌相关基因突变的试剂盒，其特征在于：所述肺癌相关基因为ALK基因、BRAF基因、EGFR基因和KRAS基因；所述试剂盒中含有权利要求1中所述的引物对组；

所述试剂盒中还含有权利要求1中所述的记载有“检测待测者的肺癌相关基因是否发生突变的方法”的可读性载体。

4.根据权利要求3所述的试剂盒，其特征在于：所述试剂盒中还含有正常人基因组DNA对照品。