[发明专利]一种鉴别6种紫檀属木材的DNA组合条形码及其鉴别方法和应用有效
| 申请号： | 201710511802.2 | 申请日： | 2017-06-27 |
| 公开（公告）号： | CN107164525B | 公开（公告）日： | 2018-07-06 |
| 发明（设计）人： | 焦立超;殷亚方;何拓;余敏;刘波;张永刚;姜笑梅 | 申请（专利权）人： | 中国林业科学研究院木材工业研究所 |
| 主分类号： | C12Q1/6895 | 分类号： | C12Q1/6895;C12N15/11 |
| 代理公司： | 北京和信华成知识产权代理事务所(普通合伙) 11390 | 代理人： | 胡剑辉 |
| 地址： | 100091 北京市*** | 国省代码： | 北京;11 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 鉴别 条形码 紫檀属 木材 条形码序列 传统木材 高效可靠 木材经营 执法部门 质量检验 应用 贸易 检疫 海关 | ||
1.一种鉴别6种紫檀属木材的DNA组合条形码，其特征在于，所述DNA组合条形码是matK+ndhF-rpl32+ITS2组合条形码；所述matK+ndhF-rpl32+ITS2序列如SEQ ID No. 9-14所示；所述6种紫檀属木材分别为安哥拉紫檀Pterocarpus angolensis DC.、印度紫檀Pterocarpus indicus Willd.、大果紫檀Pterocarpus macrocarpus Kurz、檀香紫檀Pterocarpus santalinus L.f.、非洲紫檀Pterocarpus soyauxii Taub. 及染料紫檀Pterocarpus tinctorius Welw.。
2.一种鉴别6种紫檀属木材的方法，其特征在于，包括以下步骤：
（1）将木材样品研磨处理成木粉；
（2）提取步骤（1）所得的木粉样品的DNA；
（3）以步骤（2）提取得到的DNA为模板，PCR扩增所述matK、ndhF-rpl32和ITS2条形码序列；
（4）将步骤（3）得到的PCR扩增产物进行测序，得到matK、ndhF-rpl32和ITS2序列，并对其进行组合；
（5）以步骤（4）所得的matK+ndhF-rpl32+ITS2条形码组合与权利要求1中所述6种紫檀属木材的matK+ndhF-rpl32+ITS2序列进行聚类分析，构建系统发育进化树，鉴别树种。
3.如权利要求2所述的方法，其特征在于，扩增matK序列的正反引物如SEQ ID No.1-2所示，扩增ndhF-rpl32序列的正反引物如SEQ ID No. 3-4所示 ，扩增ITS2序列的正反引物如SEQ ID No.5-6所示。
4.如权利要求2所述的方法，其特征在于，步骤（3）所述PCR扩增反应体系为0.5-3U DNA聚合酶、1.0-2.0mM MgCl2、200μM单一dNTP、0.1-5.0μM单一引物、pH7.0-8.0的0.1-1.5mg/mL牛血清白蛋白和10-1000ng模板DNA；PCR反应条件为94-96°C预变性0.5-10min；94-96°C变性0.05-2min，40-65°C退火0.5-2min，72°C延伸0.3-2min，循环20-50次；72°C终延伸2-15min。
5.如权利要求2所述的方法，其特征在于，步骤（5）中系统发育进化树法基于邻接法鉴别。
6.权利要求1所述DNA组合条形码，或权利要求2~5任意一项所述鉴别6种紫檀属木材的方法在紫檀属木材鉴别中的应用。
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