[发明专利]大曲中土臭素和2‑甲基异冰片的检测方法

说明书

技术领域

本发明具体涉及大曲中土臭素和2-甲基异冰片的检测方法，属于发酵产物分析技术领域。

背景技术

臭和味是生活饮用水标准检测方法中的感官性状和物理指标，而土臭素和2-甲基异冰片主要是一些蓝藻和链霉菌以及真菌的代谢产物，是造成水、鱼肉以及红酒等中霉味或土味的主要原因。在白酒中土霉味普遍存在，其主要是在水、大曲和窖泥中产生并对香气和口感的影响最为严重，会让人产生腐坏发霉的印象。

中国白酒界素有“曲是酒之骨”之说，就是说酒曲对发酵产酒起到了搭框架的作用。经过长期的摸索排查工作，白酒中土霉味主要来源于大曲，而这种土霉味主要成分是土臭素和2-甲基异冰片。但是目前有关土臭素和2-甲基异冰片的研究主要还是在生活饮用水和水产养殖方面，在大曲中的研究还不是特别的成熟。

发明内容

为解决上述现有技术所存在的不足之处，本发明公开了大曲中土臭素和2-甲基异冰片的检测方法，以期能够对大曲中微量异味成分进行准确定量。

为实现发明目的，本发明采用如下技术方案：

本发明大曲中土臭素和2-甲基异冰片的检测方法，其特点在于：首先通过蒸馏的方法提取待检测大曲中的香气组分，然后用顶空固相微萃取富集所得蒸馏液中的组分，再进入气质连用仪进行检测，从而实现对大曲中土臭素和2-甲基异冰片的定性、定量分析。具体包括如下步骤：

A、蒸馏：称取10g大曲粉于蒸馏瓶中，再加入150mL超纯水混匀，100-120℃加热蒸馏，收取50mL蒸馏液(在条件优化的结果，50mL蒸馏液回收率最好)；

其中加热是采用电加热套的形式进行，因为大曲中含有糖分比较多，在蒸馏的过程中会产生大量的气泡从而导致实验失败，所以在蒸馏的过程中一定要掌握好电加热套对温度控制。电加热套温度控制在100-120℃，使大曲混合液保持微沸状态，可以有效避免气泡的产生。

B、顶空固相微萃取：在顶空瓶中加入3g NaCl，再加入转子，然后吸取8mL步骤A所得蒸馏液至所述顶空瓶中，再添加16μL 1mg/L的L-薄荷醇内标溶液，立即密闭顶空瓶；控制转子转速为400r/min，然后将三相萃取头插入顶空瓶中，于50℃恒温萃取60min；

所用三相萃取头为50/30μm DVB/CAR/PDMS萃取头；

C、GC-MS分析：在顶空固相微萃取结束后，将萃取头插入到气质连用仪的进样口，250℃解析5min，实现对大曲中土臭素和2-甲基异冰片的定性、定量分析。

其中：

气相色谱条件为：

色谱柱为ZB-WAX毛细管柱60m×0.25mm×0.25μm；

进样口温度250℃，质谱检测器温度230℃，载气He，流速1mL/min，不分流进样：

程序升温条件为：初始柱温60℃，保持2min；然后以6℃/min上升至220℃，保持20min；

质谱条件为：

气相色谱与质谱接口温度为230℃；

电离方式为电子轰击源EI；

监测方式为选择性离子扫描模式SIM，电离能量70eV；

溶剂延迟为11min。

具体的，对大曲中土臭素和2-甲基异冰片的定性分析是通过比对母离子和子离子，来确认待测大曲中是否含有土臭素和2-甲基异冰片；

具体的，对大曲中土臭素和2-甲基异冰片进行定量分析的方式为：以标准品与内标物特征离子峰的峰面积之比为横坐标、以标准品与内标物的浓度之比为纵坐标，绘制标准曲线；通过标准曲线对大曲中土臭素和2-甲基异冰片进行定量分析。

标准曲线的获取方式如下：

1、配制单标储备液：分别取100mg/L的土臭素和2-甲基异冰片标准品，分别用10％甲醇溶液配制成10mg/L的单标储备液，储存于4℃冰箱保存；

2、配制混合标准储备液：分取10mg/L的土臭素和2-甲基异冰片的单标储备液1.25mL于25ml容量瓶中，用10％甲醇定容至25mL，其浓度为500ppb；

3、配制混合标准使用液：分别取混合标准储备液5μL、25μL、50μL、100μL、150μL、200μL至25mL容量瓶中，用水定容至刻度线，配制成混合标准系列溶液；

4、对各混合标准使用液按步骤B进行顶空固相微萃取，然后按照步骤C进行分析；以土臭素和2-甲基异冰片标准品与内标物(L-薄荷醇)特征离子峰的峰面积之比为横坐标、以土臭素和2-甲基异冰片标准品与内标物的浓度之比为纵坐标，绘制标准曲线；

回收率如表1所示：