[发明专利]一种降低核桃外植体褐变率的培养基及培养方法

权利要求书

1.一种降低核桃外植体褐变率的培养方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)外植体培养前处理：采集核桃未木质化新梢，选取带有饱满芽的枝段，剪至3-4厘米长，进行清洗和消毒；

(2)初代培养：将蛭石倒入培养瓶中，加入培养液，盖上瓶盖，灭菌，即配制成初代培养基；将消毒后的外植体接于初代培养基中，培养12-14天；蛭石与所述培养液的配比为：每10g蛭石中混合添加有15-25mL培养液；所述培养液包括以下成分：硝酸铵1.4-1.5g/L；硝酸钙1.8-2.0g/L；硝酸锌0.015-0.02g/L；硫酸钾1.5-1.7g/L；硫酸镁0.6-0.8g/L；硫酸锰0.03-0.04g/L；硫酸铜0.002-0.003g/L；氯化钙0.15-0.2g/L；磷酸二氢钾0.2-0.5g/L；硼酸0.004-0.007g/L；钼酸钠0.003-0.004g/L；乙二胺四乙酸二钠0.05-0.06g/L；硫酸亚铁0.03-0.05g/L；盐酸硫胺素0.001-0.003g/L；烟酸0.001-0.002g/L；甘氨酸0.001-0.003g/L；肌醇0.1-0.2g/L；蔗糖25-35g/L；6-苄氨基腺嘌呤0.0005-0.0015g/L；吲哚丁酸0.00001-0.00003g/L，pH 5.5-6.0；初代培养25℃，光照循环：100μmol·m^-2·s^-116h+黑暗8h；

(3)继代培养：将初代培养得到的外植体转接到所述培养液的琼脂培养基中，进行继代培养；所述培养液的琼脂培养基为每升所述培养液中添加6.5-7.5g琼脂制得。

2.根据权利要求1所述的一种降低核桃外植体褐变率的培养方法，其特征在于：所述步骤(1)中清洗和消毒的具体方法为：使用1％洗洁精清洗浸泡5min，流水清洗20min；后用75％酒精消毒30s，流水清洗5-8次；再用0.1％升汞浸泡6-8min，无菌水清洗5-8次。