[发明专利]一种降低核桃外植体褐变率的培养基及培养方法

说明书

本发明公开了一种降低核桃外植体褐变率的培养基，包括蛭石和培养液；并且公开了一种降低核桃外植体褐变率的培养方法，于上述培养基中进行初代培养，并转接于培养液的琼脂培养基中进行继代培养。本发明培养基及培养方法防止核桃外植体褐化的效果显著，且适用于多种核桃品种，应用范围广，利于提高组培繁殖的成活率，加速良种及良砧无性苗的繁育。

技术领域

本发明涉及植物组织培养领域，具体地说，涉及一种降低核桃外植体褐变率的培养基及培养方法。

背景技术

核桃(Juglans regia L.)别名胡桃、羌桃，属于胡桃科核桃属植物，是一种优良的干果树种，具有极高的经济价值与营养价值。目前，核桃的无性繁殖普遍采用嫁接的方法，其繁殖系数低、速度慢，成活率不稳定且易受穗条数量限制，导致不少地区仍采用实生苗进行繁殖培育，严重限制了核桃的商业性生产；因此，利用组培快速繁殖技术，加速良种及良砧无性苗的繁育，具有很高的商业价值。

然而，核桃细胞中含有丰富的酚类物质，在组织培养过程中，酚类物质从外植体切口向外溢出，氧化产生棕褐色的醌类物质，使外植体组织变成褐色；醌类物质与外植体组织中的蛋白质发生聚合，引起酶系统的失活，从而导致外植体组织代谢活动紊乱，生长和分化停滞，最终衰老死亡；并且醌类物质扩散到培养基中也会进一步地促进外植体衰老死亡。因此，防止核桃组培外植体褐化是保证核桃组培成功关键所在，而核桃外植体的褐化程度与核桃选取的树龄，剪取枝段的部分、月份，培养基的成分，抗氧化剂的种类都有关系，所以亟待设计一种解决核桃外植体褐化问题的培养基及培养方法。

发明内容

基于现有技术的不足之处，本发明提供一种降低核桃外植体褐变率的培养基及培养方法。

本发明为了实现上述目的所采取的技术方案是：

一种降低核桃外植体褐变率的培养基，其特征在于：包括蛭石和培养液。

进一步地，所述蛭石与所述培养液的配比为：每10g蛭石中混合添加有15-25mL培养液。

进一步地，所述培养液包括以下成分：硝酸铵1.4-1.5g/L；硝酸钙1.8-2.0g/L；硝酸锌0.015-0.02g/L；硫酸钾1.5-1.7g/L；硫酸镁0.6-0.8g/L；硫酸锰0.03-0.04g/L；硫酸铜0.002-0.003g/L；氯化钙0.15-0.2g/L；磷酸二氢钾0.2-0.5g/L；硼酸0.004-0.007g/L；钼酸钠0.003-0.004g/L；乙二胺四乙酸二钠0.05-0.06g/L；硫酸亚铁0.03-0.05g/L；盐酸硫胺素0.001-0.003g/L；烟酸0.001-0.002g/L；甘氨酸0.001-0.003g/L；肌醇0.1-0.2g/L；蔗糖25-35g/L；6-苄氨基腺嘌呤0.0005-0.0015g/L；吲哚丁酸0.00001-0.00003g/L，pH5.5-6.0。

进一步地，所述培养液成分为：硝酸铵1.416g/L，硝酸钙1.968g/L，硝酸锌0.017g/L，硫酸钾1.5592g/L，硫酸镁0.74g/L，硫酸锰0.0335g/L，硫酸铜0.0025g/L，氯化钙0.18625g/L，磷酸二氢钾0.33125g/L，硼酸0.006g/L，钼酸钠0.0039g/L，乙二胺四乙酸二钠0.05675g/L，硫酸亚铁0.04225g/L，盐酸硫胺素0.0025g/L，烟酸0.00125g/L，甘氨酸0.0025g/L，肌醇0.125g/L，蔗糖30g/L，6-苄氨基腺嘌呤0.001g/L，吲哚丁酸0.00002g/L，pH5.5-6.0。

一种降低核桃外植体褐变率的培养方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)外植体培养前处理：采集核桃未木质化新梢，选取带有饱满芽的枝段，剪至3-4厘米长，进行清洗和消毒；

(2)初代培养：将蛭石倒入培养瓶中，加入培养液，盖上瓶盖，灭菌，即配制成初代培养基；将消毒后的外植体接于初代培养基中，培养12-14天；