[发明专利]一种外周血NK细胞体外高效扩增方法

权利要求书

1.一种外周血NK细胞体外扩增方法，其特征在于，所述的方法是将外周血单核淋巴细胞接种到预先用CD16单抗，CD56单抗和CD3单抗进行包被的培养容器中，并在培养过程中添加细胞因子IL-15再次活化NK细胞；

所述的方法包括如下的步骤：

1)培养瓶的包被：

将溶有CD3单抗、CD16单抗和CD56单抗的PBS溶液作为包被液，将包被液加入到培养瓶中进行包被；所述的CD3单抗、CD16单抗和CD56单抗的浓度范围分别为1ng～100ng/ml，1μg～20μg/ml，1μg～20μg/ml；

2)细胞接种：用淋巴分离液从外周血中分离获得人外周血单核细胞，将人外周血单核细胞接种到预先包被的培养瓶中，并添加10％的自体血浆和终浓度为500IU/ml的IL-2，37℃，5％CO₂培养；

3)扩大培养：接种后的细胞在培养到第3天时，补充培养基和终浓度为200IU/ml的IL-2，37℃，5％CO₂培养，

4)二次刺激：第五天补加补充培养基GT-T551H3，终浓度为200IU/ml的IL-2和终浓度为50ng/ml的IL-15对NK细胞进行二次刺激；

5)扩大培养：每隔2-3天补加培养基和终浓度为200IU/ml的IL-2；

6)收获细胞：在培养的第17天，离心收集全部培养所得细胞。

2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的步骤1)的包被液中，CD3单抗、CD16单抗和CD56单抗的优选浓度分别为10ng/ml，5μg/ml，5μg/ml。

3.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的步骤1)的包被是在4℃避光4-24小时或者室温避光2-4个小时或者37℃避光1个小时。