[发明专利]一种慢性乙肝治疗性DC疫苗

说明书

本发明公开了一种慢性乙肝治疗性DC疫苗，包括经基因修饰的树突状细胞，所述经基因修饰的树突状细胞中含有粒细胞‑巨噬细胞簇因子受体信号肽引导编码M‑HBsAg的preS2区域和S区域的融合基因片段，该发明能够免疫机体时就可以产生针对pres2抗原的特性抗体，这些抗体具有良好的中和HBV病毒的作用，从而保护宿主免受HBV病毒的感染，可以诱导HBsAg‑HBsAb的血清学转化，降低肝内的乙肝病毒感染，增强免疫效果。

技术领域

本发明涉及生物医疗技术领域，更具体的说，是一种慢性乙肝治疗性DC疫苗。

背景技术

乙型肝炎病毒(Hepatitis B virus，HBV)，全球流行最广的嗜肝病毒，感染后可引起急、慢性和重型肝炎，并与肝硬化、肝癌的发病密切相关。在我国，HBV携带者约9300万人，其中慢性乙肝患者高达2500万，是我国最为严重的三大传染病之一。目前临床上对慢性乙肝患者的主要治疗药物包括核苷(酸)类似物、干扰素和免疫调节剂，这些药物均不能彻底清除乙肝病毒，并且复发率高。因此，研发有效的治疗策略显得极为迫切。

如何诱导强有力的特异性细胞免疫反应，打破体内HBV特异性T细胞免疫耐受已经成为目前的主要研究方向。由于DC疫苗在诱导机体特异性细胞免疫方面具有独特优势，已作为针对慢性乙肝具有潜力的免疫治疗手段被广泛研究。目前慢性乙肝DC疫苗研究的焦点：(1)如何获得有效的HBV抗原(抗原必须在慢性乙肝中不耐受)。(2)如何进一步增强DC疫苗的免疫效应。

HBV表面蛋白质或抗原(HbsAg)是由preS(preS1和preS2)区域及S区域的基因通过三种起始密码子各自进行交替翻译编码的三种包膜蛋白(L蛋白，M蛋白和S蛋白)。S-HbsAg由226个氨基酸组成，仅包括S区域，是慢性乙型肝炎患者血清中假病毒颗粒的主要成分，也是目前临床预防性乙肝疫苗的成分；M-HBsAg是由281个氨基酸组成，包括S和preS2区域，也是假病毒颗粒的重要组成成分；L-HBsAg是约400个氨基酸组成(根据乙肝不同亚型，ay型389个，ad型400个)，包括preS1域，preS2域及S域。目前研究表明：慢性HBV感染过程中，不同的病毒抗原存在不同的耐受状态。S区域存在着很强的免疫耐受状态，直接以此作为疫苗，无法在HBV耐受小鼠中产生治疗性效果。

发明内容

为了弥补以上不足，但是以preS1区域作为疫苗就能够在HBV耐受模型体内引起细胞免疫反应。并且联合preS1疫苗和HBsAg疫苗，可以诱导HBsAg-HBsAb的血清学转化，降低肝内的乙肝病毒感染。由此可知，同时含有preS1抗原和S抗原的疫苗与只含有S抗原的疫苗相比免疫原性更强。由此本发明提供一种慢性乙肝治疗性DC疫苗

本发明的方案是：

一种慢性乙肝治疗性DC疫苗，包括经基因修饰的树突状细胞，所述经基因修饰的树突状细胞中含有粒细胞-巨噬细胞簇因子受体信号肽引导编码M-HBsAg的preS2区域和S区域的融合基因片段。

作为优选的技术方案，所述粒细胞-巨噬细胞簇因子受体信号肽为序列表SEQ IDNO.1所示的核苷酸序列。

作为优选的技术方案，所述M-HBsAg为序列表SEQ ID NO.2所示的核苷酸序列。

本发明还提供了一种将树突状细胞负载融合基因片段的方法：将所述粒细胞-巨噬细胞簇因子受体信号肽引导编码M-HBsAg的preS2区域和S区域的基因片段缓慢插入慢病毒表达载体pLent-C-GFP中，包装成携带GM-CSFR SP-M-HBsAg编码基因的慢病毒，同时，将慢性乙型肝炎患者的体外周血单个核细胞诱导成imDC，将携带GM-CSFR SP-M-HBsAg编码基因的慢病毒感染所述imDC，并将感染后的imDC经成熟因子诱导，得到成熟DC疫苗。