[发明专利]一种采用液质联用法测定盐酸培唑帕尼基因毒性杂质的分析方法

说明书

本发明名称为一种采用液质联用法测定盐酸培唑帕尼基因毒性杂质的分析方法，属于药物分析技术领域。本发明采用高效液相色谱‑三重四极杆质谱联用仪为检测仪器，质谱检测采用电喷雾离子源和多反应监测模式，液相色谱采用碳十八色谱柱为固定相，以甲酸水溶液和甲酸乙腈溶液为流动相，采取梯度洗脱方式。所建立的HPLC‑MS/MS方法能够同步、快速、准确地测定盐酸培唑帕尼中4种潜在基因毒性杂质，为其质量标准的制定提供了可靠依据。

技术领域

本发明属于药物分析技术领域，具体公开了一种采用HPLC-MS/MS法测定盐酸培唑帕尼中4种基因毒性杂质的药物分析方法。

背景技术

盐酸培唑帕尼(pazopanib hydrochloride)由葛兰素史克公司率先开发，该化合物的口服制剂于2009年10月获得美国食品药品监督管理局(FDA)批准在美国的上市，商品名为Votrient，是第二代多靶点酪氨酸激酶抑制剂，对血管内皮生长因子受体、血小板源性生长因子受体等有明显的抑制作用，用于治疗晚期肾细胞癌、软组织肉瘤、晚期卵巢癌等疾病，是疗效显著的抗肿瘤激酶抑制剂。

基于临床疗效方面的优越性和市场需求，企业界对培唑帕尼的工艺优化、质量控制进行了不懈的深入探索，而作为产品质量控制的重要组成部分，基因毒性杂质的研究随着国内外药政部门相关法规的逐步健全，已成为影响产品获批上市的关键因素之一。根据原研企业葛兰素史克公司于2009年在期刊Journal of Pharmaceutical and BiomedicalAnalysis上所发表的题为《Analytical control of genotoxic impurities in thepazopanib hydrochloride manufacturing process》的文献(以下简称“该文献”)，该公司依据“质量源于设计”的理念对培唑帕尼合成路线中潜在基因毒性杂质的传递规律、检测方法和控制限度进行了研究。依据FDA、EDQM及ICH的相关法规和毒理研究，原研公司将路线中的化合物Ⅱ、Ⅲ、Ⅵ、Ⅷ及作为起始原料之一的DMS确定为基因毒性杂质，控制限度分别是：DMS、化合物Ⅱ、化合物Ⅲ、化合物Ⅷ，均为1.7ppm，化合物Ⅵ为115ppm。

上述化合物除DMS由于结构特点须经衍生化另行检测外，该文献中化合物Ⅱ、Ⅲ、Ⅵ、Ⅷ均可直接采用液相色谱-质谱联用法进行测定。原研公司使用不同的离子源、扫描模式、色谱柱、流动相体系分别为化合物Ⅱ、Ⅲ、Ⅵ、Ⅷ建立了4种等度洗脱的HPLC-MS方法，其缺点在于：(1)4种杂质无法实现同时检测，在使用同一台液质联用仪检测时，离子源与流动相的频繁更换降低了检测效率；(2)用一级质谱的准分子离子峰[M+H]⁺或[M-H]^-进行定量，不利于复杂基质干扰的排除和灵敏度的进一步提高。

发明内容

为了解决上述技术问题，本发明提供一种可同步检测盐酸培唑帕尼中上述4种基因毒性杂质的HPLC-MS/MS分析方法，本发明与该文献相比，重要区别特征及有益进步为：(1)液相色谱部分，采用甲酸水溶液和甲酸乙腈溶液为流动相，以内径和长度均小于该文献方法的色谱柱为固定相，采用梯度洗脱方式，在13min内使化合物Ⅱ、Ⅲ、Ⅵ、Ⅷ均可出峰并检测；(2)质谱检测器部分，统一采用电喷雾离子源(ESI)和多反应检测模式(MRM)，以二级质谱的碎片离子峰进行定量，进一步提高了杂质的灵敏度和专属性。

具体地，本发明的分析方法的内容如下：

(1)仪器：高效液相色谱-三重四极杆质谱联用仪

(2)质谱参数

扫描模式：多反应监测(MRM)

碰撞气压力(CAD)：4Psi～8Psi，优选5Psi～7Psi，更优选6Psi

雾化气压力(GS1)：45Psi～65Psi，优选50～60Psi，更优选55Psi