[发明专利]一种高通量水稻叶片DNA提取的方法

说明书

本发明涉及一种高通量水稻叶片DNA提取的方法，包括取适量水稻叶片放入适当容器中，置于55‑65℃条件下烘烤至干；研磨；然后加入DNA提取液，混匀后进行提取；将提取液离心；取适量上清液，加入19‑60倍体积的超纯水，混匀，即得DNA。本发明方法优点：不用到任何一种有机溶剂，安全无毒；无需用液氮进行处理，烘箱烘干叶片的操作方法对实验条件依赖度低，容易实现，且对结果没有影响；高度匹配移液工作站，实现高通量自动化。

技术领域

本发明涉及一种高通量水稻叶片DNA提取的方法。

背景技术

利用CTAB等方法提取的水稻叶片DNA可以满足KASP基因型分型的要求，Arraytape上均能得到较好的结果。但这种方法耗时长，通量低，并且用到大量氯仿等有毒有机溶液，仅适用于测序或基因芯片等对于DNA质量要求高的实验，对于大规模高通量叶片DNA提取如基因鉴定，纯系材料少量标记分型等则非常不适宜。因此开发不使用有毒有机试剂的快速提取水稻叶片DNA的方法是非常必要的。

通过赫然“快速制备水稻基因组DNA PCR模板的煮沸法”，我们知道利用TE缓冲液进行沸水浴可以提取水稻叶片DNA，该DNA可以满足普通PCR实验的要求。我们希望找到一种可以进行高通量水稻叶片DNA提取的方法，并且可以满足KASP基因型分型的要求。

发明内容

本发明目的是提供一种高通量水稻叶片DNA提取的方法，以满足KASP基因型分型的要求。

本发明技术方案如下：

一种高通量水稻叶片DNA提取的方法，包括：取适量水稻叶片放入适当容器中，置于55-65℃条件下烘烤至干(一般烘烤60-90min)；研磨；然后加入DNA提取液，混匀后进行提取；将提取液离心；取适量上清液，加入19-60体积倍(优选29-59体积倍)的超纯水，混匀，即得DNA。

一般地可用96孔板(例如NUNC96孔深孔板)或酶标板作为容器，既可以盖硅胶盖也可以封上铝箔纸膜。

一般地，可于烘箱中烘烤；对于大多数水稻叶片，可于65℃条件下烘烤60min左右。

本发明可采用常规方法进行研磨；例如研磨时加入适量钢珠(直径4mm)。也可采用genogrinder进行研磨，通常可于1200-1400rpm研磨1-3分钟(例如1200rpm研磨2分钟)。

优选地，以mg/uL计，水稻叶片与DNA提取液的质量体积比为(15-40):(500-700)，优选为20:(500-600)，更优选为20:500。

优选地，所述提取温度为65-80温度，进一步优选为75℃。

优选地，所述提取时间为30-45min，进一步优选为30min。

优选地，所述提取过程中同时或间隔一段时间(例如每15-20min)进行混匀处理(如用漩涡振荡器)。

一般地，可于烘箱中进行提取。

一般地，可于3600-5300rpm、离心10-20min(例如4000rpm、离心10min)。

所述DNA提取液配方如下：