[发明专利]蜂蜜快速检测试纸条的制备方法及其试纸条与应用

权利要求书

1.一种蜂蜜快速检测试纸条的制备方法，其特征在于，步骤如下：

1）针对MRJP1的多克隆抗体SP-1和SP-2的制备和纯化：

1.1通过对MRJPs蛋白家族氨基酸序列作同源性分析，筛选出MRJP1不同于其他家族成员的氨基酸序列：分别位于MRJP1第56-70位的寡肽1-SGEYDYKNNYPSDID，第360-372位的寡肽2- IKEALPHVPIFD，即分别为抗体SP-1和SP-2所对应的抗原多肽；

1.2根据寡肽1和寡肽2的氨基酸序列，进行化学合成，将多肽与KLH偶联，作为免疫抗原；

1.3分别将2个免疫抗原与缓冲液和佐剂混合，在第1d、15d、29d、43d分别多点注射新西兰大白兔2只；

1.4第53 d，颈动脉取血，收集血清，通过抗原亲和柱纯化、透析，分别得到MRJP1的特异性抗体SP1和SP2；

2）胶体金溶液的制备：取氯金酸水溶液制备成含有粒径为20-40 nm的胶体金颗粒的胶体金溶液；

3）胶体金标记抗体：取SP-1抗体加入到胶体金溶液中，制备成免疫胶体金溶；

4）在硝酸纤维素膜上包被C线和T线，其中C线为质控线，包被商用羊抗兔lgG，T线为检测线，包被上述步骤1）制得的SP-2抗体；用划膜机点在硝酸纤维素膜上即得C线和T线，使C线和T线相距5 mm；室温晾干，得到包被后的硝酸纤维素膜；

5）胶体金免疫层析快速检测试纸条的组装：将样品垫、上述步骤4）所得包被后的硝酸纤维素膜和吸水垫一次粘贴到聚氯乙烯（PVC）底板上，切割成2~3 mm宽的条状，即得快速检测试纸条；4℃避光干燥保存。

2.一种如权利要求1所述的制备方法得到的蜂蜜快速检测试纸条。

3.一种如权利要求2所述的蜂蜜快速检测试纸条的应用，其特征在于，包括以下步骤：

（a）蜂蜜样品检测液的准备：将蜂蜜样品用纯水以质量比1：1稀释，混匀，4℃抽提过夜；将抽提液离心，12000 rpm，离心30 min，取上清，得蜂蜜样品水提液；将蜂蜜样品水提液移入透析袋，在去离子水中透析过夜，得到蜂蜜透析液；

（b）用移液枪吸取步骤（a）所得待检样品溶液80-100 μL，滴加于96孔酶标板内；

（c）将金标试纸条从干燥器中取出，于试纸条样品垫上点加金标抗体浓缩液8 μL；将试纸条样品垫一端插入待检样品溶液中；

（d）在插入试纸条5-10 min读取结果，读取时，将试纸条以样品垫一端向下的方式垂直至于观察者正面；

（e）结果判断：C线显示为红色线条，当T线显色，结果为阳性，待测样品中含有MRJP1；当T线不显色，结果为阴性，待测样品中不含MRJP1：即所测蜂蜜为掺假蜂蜜；C线不显示的为红色线条，结果无效。