[发明专利]用于鉴别辽参的实时荧光PCR引物检测方法及应用在审
| 申请号： | 201710544920.3 | 申请日： | 2017-07-06 |
| 公开（公告）号： | CN109234424A | 公开（公告）日： | 2019-01-18 |
| 发明（设计）人： | 李君 | 申请（专利权）人： | 大连长生岛集团有限公司 |
| 主分类号： | C12Q1/6895 | 分类号： | C12Q1/6895;C12Q1/686;C12N15/11 |
| 代理公司： | 大连非凡专利事务所 21220 | 代理人： | 闪红霞 |
| 地址： | 116000 辽*** | 国省代码： | 辽宁;21 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 实时荧光PCR 特异引物 通用引物 辽参 核苷酸序列 鉴别 扩增曲线 通用引物对 待测样品 引物检测 低成本 扩增 样本 检测 应用 | ||
1.一种用于鉴别辽参的实时荧光PCR引物,其特征在于所述引物核苷酸序列如下：
特异引物：
上游引物HS-COIF：5'TCCAGACATGGCTTTCCCAC 3'，
下游引物HS-COIR：5'AGAATTGAGGAGGCACCAGC 3'；
通用引物：
上游引物HS-16SF：5'AAAACAGAAAGACGAGAAGACCCT 3'，
下游引物HS-16SR：5'CGCTGTTATCCCTGCGGTAG 3'。
2.一种用于鉴别辽参的实时荧光PCR方法，其特征在于依次按照如下步骤进行：
a. 提取待测样品DNA；
b. 以所得到的DNA为模板,分别以特异引物和通用引物进行实时荧光PCR扩增，所用引物的核苷酸序列如下：
特异引物：
上游引物HS-COIF：5'TCCAGACATGGCTTTCCCAC 3'，
下游引物HS-COIR：5'AGAATTGAGGAGGCACCAGC 3'；
通用引物：
上游引物HS-16SF：5'AAAACAGAAAGACGAGAAGACCCT 3'，
下游引物HS-16SR：5'CGCTGTTATCCCTGCGGTAG 3'；
c.分别检测特异引物和通用引物进行实时荧光PCR扩增曲线Ct值, 如特异引物和通用引物实时荧光PCR均有扩增曲线Ct值,则被测样本为辽参。
3.根据权利要求2所述用于鉴别辽参的实时荧光PCR方法，其特征在于所述实时荧光PCR扩增的反应体系为: 2×SYBRGreen Mix 10 µL，浓度1 µmol/mL的引物各0.2~1µL，50×Rox0.4 µL，浓度1~20 ng/µL 的DNA模板2.0 µL，用双蒸水补足至20 µL；反应条件为95℃，2min；95℃，10s；64℃，35s，检测荧光信号；40个循环。
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