[发明专利]一种脯氨酸‑4‑羟化酶及其重组表达宿主菌的应用在审
| 申请号： | 201710546679.8 | 申请日： | 2017-07-06 |
| 公开（公告）号： | CN107189990A | 公开（公告）日： | 2017-09-22 |
| 发明（设计）人： | 石贵阳;朱惠霖;吴志勇;李由然 | 申请（专利权）人： | 江南大学 |
| 主分类号： | C12N9/02 | 分类号： | C12N9/02;C12N15/53;C12N1/21;C12P13/24;C12R1/125 |
| 代理公司： | 无锡华源专利商标事务所(普通合伙)32228 | 代理人： | 聂启新 |
| 地址： | 214122 江苏*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 脯氨酸 羟化酶 及其 重组 表达 宿主 应用 | ||
1.一种脯氨酸-4-羟化酶，其特征在于编码该所述酶的基因序列如SEQ ID No.1所示；所述酶的蛋白质序列如SEQ ID No.2所示。
2.一种含有权利要求1所述脯氨酸-4-羟化酶的重组枯草芽孢杆菌，其特征在于所述菌株的重组方法包括如下步骤：
(1)制备来源于指孢囊菌(Dactylosporangium sp.RH1)，经过芽孢杆菌密码子优化的脯氨酸-4-羟化酶基因p4h；
(2)将步骤(1)制得的脯氨酸-4-羟化酶基因p4h连接到含有木糖启动子的诱导型表达载体pHY-Bs.xyl上，制得含有脯氨酸-4-羟化酶的重组质粒pHY-Bs.xyl-P4H；
(3)将步骤(2)所得的重组质粒转入枯草芽孢杆菌WB600中，得到重组菌WB600/pHY-Bs.xyl-P4H，即所述重组枯草芽孢杆菌。
3.一种权利要求2所述重组枯草芽孢杆菌的应用，其特征在于该重组枯草芽孢杆菌可用于合成反式-4-羟脯氨酸。
4.一种含有权利要求1所述脯氨酸-4-羟化酶的经遗传改造的重组枯草芽孢杆菌，其特征在于所述菌株的构建方法如下：
(1)敲除原始菌株WB600的谷氨酰胺合成酶基因glnA；且过表达谷氨酸激酶基因proB，构建了重组菌WB601；
(2)制备来源于指孢囊菌(Dactylosporangium sp.RH1)，经过枯草芽孢杆菌密码子优化的脯氨酸-4-羟化酶基因p4h；
(3)将步骤(2)制得的脯氨酸-4-羟化酶基因p4h连接到含有木糖启动子的诱导型表达载体pHY-Bs.xyl上，制得含有脯氨酸-4-羟化酶的重组质粒pHY-Bs.xyl-P4H；
(4)将步骤(3)制得的重组质粒pHY-Bs.xyl-P4H转入WB601中，得到重组菌WB601/pHY-Bs.xyl-P4H，即所述经遗传改造的重组枯草芽孢杆菌。
5.一种权利要求4所述经遗传改造的重组枯草芽孢杆菌的应用，其特征在于该重组枯草芽孢杆菌可用于合成反式-4-羟脯氨酸。
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