[发明专利]一种促进裂殖壶菌产油脂的方法

权利要求书

1.一种促进裂殖壶菌产油脂的方法，其特征在于：在裂殖壶菌的发酵培养基中一次添加终浓度为0.005-0.5g/L的苯甲酸对位衍生物，添加苯甲酸对位衍生物的时机为发酵培养开始至发酵培养结束前1~2d中的任意时间；该苯甲酸对位衍生物为对氨基苯甲酸；

具体包括如下步骤：

（1）将保存在甘油管中的裂殖壶菌接入18~22 mL的种子培养基中，接种量为2~10%，于20~30℃的温度及150~200 rpm的转速下，培养24~48 h，获得一级种子；

（2）将上述一级种子接入18~22 mL的种子培养基中，接种量为2~10%，于20~30℃的温度及150~200 rpm的转速下，培养24~48 h，获得二级种子；

（3）将二级种子接入45~55mL的发酵培养基中，接种量为2~10%，于20~30℃的温度及150~200 rpm的转速下，培养4~7dh，期间择机一次加入苯甲酸对位衍生物，以发酵生产多不饱和脂肪酸，得发酵液，添加苯甲酸对位衍生物的时机为发酵培养开始至发酵培养结束前1~2d中的任意时间；

（4）对上述发酵液中的油脂进行提取和纯化；

上述种子培养基的pH为6~8，配方为：葡萄糖30 g/L、酵母抽提物10 g/L、硫酸钠 12g/L、氯化钾 0.5g/L、硫酸镁2g/L、硫酸钾0.65g/L、磷酸二氢钾1g/L、硫酸铵1g/L、二水合氯化钙0.17g/L；

上述发酵培养基的pH为6~8，配方为：葡萄糖90 g/L、谷氨酸钠5 g/L、固体玉米将干粉5g/L、硫酸钠 12g/L、氯化钾 0.5g/L、硫酸镁2g/L、硫酸钾0.65g/L、磷酸二氢钾1g/L、硫酸铵1g/L、二水合氯化钙0.17g/L、七水合硫酸锌3mg/L、六水合氯化钴0.04mg/L、五水合硫酸铜2mg/L、六水合硫酸镍2mg/L、七水合硫酸铁10mg/L、泛酸钙3.2mg/L、四水合氯化锰3mg/L、二水合钼酸钠0.04mg/L、维生素B₁9.5mg/L、维生素B₁₂ 0.15mg/L。

2.如权利要求1所述的方法，其特征在于：所述步骤（4）包括如下步骤：

1）准确吸取适量发酵液于1具塞试管中，混匀后再加入适量浓盐酸，于60~70℃水浴加热40~50 min至菌体消化完全；

2）再加入适量正己烷，加塞充分摇匀，静置分层，取上层有机相置于已恒重的磨口锥形瓶中，用正己烷重复洗涤3~5次，直至上层有机相无色；

3）通过氮吹的方法除去有机溶剂至恒重，计算总油脂产量。