[发明专利]用于检测CDKN2B基因变异的试剂盒及CDKN2B基因变异率的定量检测方法

说明书

本发明提供了一种CDKN2B基因变异率的定量检测方法，具体的，本发明通过采用通过在一个反应体系内完成CDKN2B表达水平和突变率两个指标的检测，来定量检测CDKN2B的变异率，与现有技术中常规定量PCR技术必须分为两步或更多步骤，才能获得该基因的变异率相比，本发明的技术方案，操作更简便，节省时间，花费更低，数据更加具有可比性。

技术领域

本发明涉及基因变异率检测方法领域，更具体的，本发明涉及一种用于检测CDKN2B基因变异的试剂盒及CDKN2B基因变异率的定量检测方法。

背景技术

CDKN2B(Cyclin-dependent kinase 4inhibitor B)是细胞周期激酶抑制因子，毗邻肿瘤抑制基因CDKN2A，是一个频发突变的区域，这些变异可以在很多肿瘤病例检测到。该基因编码细胞周期激酶抑制因子，与CDK4或CDK6形成复合物，抑制细胞周期激酶的活性，通过控制细胞周期G1的进程，功能蛋白是一种细胞生长调节作用。该基因的表达受到TGFbeta诱导，提示参与TGF beta的生长调控。

目前，CDKN2B基因的检测主要用于临床糖尿病人预测，并且由于很多基于CDK的抗肿瘤药物已经开始临床试验，该基因可以监测药物治疗中的疗效和预后，具有很高的临床应用价值，因此，CDKN2B的突变率检测是目前的研究热点之一。

现有技术中，采用常规定量PCR技术检测CDKN2B的突变率，必须分为两步或更多步骤，才能获得该基因的变异率，使用不方便，花费也高，限制了应用。本文发明的新方法，可以在一个反应体系内完成CDKN2B表达水平和突变率两个指标的检测，与现有方法比较，数据更加具有可比性，同时，节省时间和花费。

发明内容

本发明提供了一种高效、简便且特异性和灵敏度高的CDKN2B基因变异率的定量检测方法。

本发明第一方面，提供了一种用于检测CDKN2B基因变异的试剂盒，所述试剂盒用于CDKN2B基因变异率的定量检测；其中，所述试剂盒包含一对靶基因特异性引物和两条不同荧光标记的探针。

优选的，所述试剂盒中，一对靶基因特异性引物为突变区引物和保守区引物，所述两条不同荧光标记的探针分别为FAM标记的非突变探针，和vic标记的突变探针；更进一步的优选，所述①突变区引物和vic标记的突变探针的核苷酸序列分别为：

正向引物(Forward Primer)：CTTATGCAGTTCCTCACCAAAGTTT；

逆向引物(Reverse Primer)：GGATAGGAAGAGAACCGCAAGTT；

vic标记的突变探针(Probe)：VIC-AGGCAACAAATCCA-NONE；

所述②保守区引物和FAM标记的非突变探针为如下产品：

Assay ID Hs03922281_s1，

Catalog#4426961，

ABI PRODUCT USA。

本发明另一方面提供了一种CDKN2B基因变异率的定量检测检测方法，包括以下步骤：

(1)提取CDKN2B基因组DNA作为模板；

(2)向反应体系中加入PCR预混合液，权利要求1～3任一项所述的一对靶基因特异性引物和两条不同荧光标记的探针和DNA模板进行定量PCR；

(3)检测步骤(3)突变区和非突变区的荧光信号到达设定域值时所经历的循环数(CT值)；

(4)根据步骤(4)突变区和非突变区CT值计算变异系数，即变异系数(％)＝突变CT值/非突变CT值x100。