[发明专利]一种葡聚糖-g-聚(L-赖氨酸)-VAPG核酸载体及其制备方法和应用有效

专利信息
申请号: 201710549738.7 申请日: 2017-07-06
公开(公告)号: CN107397962B 公开(公告)日: 2020-04-07
发明(设计)人: 袁晓燕;周培琼;刘波;赵蕴慧;任丽霞 申请(专利权)人: 天津大学
主分类号: A61K47/64 分类号: A61K47/64;A61K48/00;A61P9/00;C08B37/02;C08G69/10
代理公司: 天津市北洋有限责任专利代理事务所 12201 代理人: 王丽
地址: 300350 天津市津南区海*** 国省代码: 天津;12
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摘要:
搜索关键词: 一种 聚糖 赖氨酸 vapg 核酸 载体 及其 制备 方法 应用
【说明书】:

本发明提供了一种葡聚糖‑g‑聚(L‑赖氨酸)‑VAPG核酸载体及其制备方法和应用。该核酸载体包括葡聚糖、聚(L‑赖氨酸)以及VAPG靶向多肽;其中,所述的聚赖氨酸由改性的葡聚糖引发ε‑苄氧羰基‑L‑赖氨酸环状酸酐单体开环制备;然后VAPG靶向多肽与葡聚糖‑g‑聚(L‑赖氨酸)通过巯基‑乙烯加成反应得到具有靶向性的核酸载体。本发明简单易得,与核酸药物复合后可以得到粒径均一,水溶性良好的纳米粒子。另外,本发明提供的核酸载体可有效地保护核酸药物进入平滑肌细胞,降低了非特异性接触的毒副作用,提高了转染效率,生物相容性和生物降解性好,在基因治疗领域有潜在的应用前景。

技术领域

本发明涉及一种葡聚糖-g-聚(L-赖氨酸)-VAPG核酸载体及其制备方法和应用,属于生物医学基因治疗领域。

背景技术

近年来,RNA干扰逐渐发展成为一种用于癌症和心血管等疾病治疗的新技术。RNA干扰通过RNA效应分子siRNA和miRNA在体内诱导靶基因mRNA特异性降解或沉默,进而调节目的基因的表达,作用迅速高效,在疾病治疗中有较高的医用价值。然而,裸露的核酸药物pDNA、miRNA和siRNA容易受到核酸酶的降解,而且较高的分子量和表面负电的特性使其难以通过细胞内吞进入细胞中发挥作用,因此安全有效的传递载体成为基因治疗的关键。阳离子聚合物是一类应用广泛的核酸载体,其表面的正电荷可以与带负电的核酸药物通过静电作用形成稳定的复合物,延缓核酸药物的降解,同时可以与带负电的细胞膜相互结合,促进细胞内吞作用。但是,表面过量的正电荷,可与细胞膜以及体内带负电的蛋白血浆之类的活性物质非特异性结合,造成细胞毒性并引发免疫反应,同时降低了转染效率,因此在临床上的进一步推广也受到限制(Jin L,Zeng X,Liu M,Deng Y,He NY.Current progress ingene delivery technology based on chemical methods and nano-carriers.Theranostics,2014,4(3):240-255.)。因此,需要设计和合成一种具有靶向性、低毒和高转染效率的核酸载体辅助核酸药物进入靶细胞。公布号为CN 105153439A的中国专利公开了一种聚乙二醇修饰的含有内皮细胞靶向肽REDV的壳聚糖核酸载体,该核酸载体可以靶向进入目标内皮细胞,促进内皮细胞增殖,避免被其他正常细胞内吞引发免疫反应,但是质子化后的壳聚糖表面带有大量的正电荷,聚乙二醇的屏蔽作用有限,载体体系与胞内血液蛋白非特异性性接触,产生细胞毒性,而且该核酸载体粒径较大,容易被机体清除,降低了转染效率。

发明内容

本发明的目的在于提供一种具有靶向性,高转染效率,低毒的,稳定并可缓慢释放的核酸载体。

本发明提供的核酸载体,其特征在于包括葡聚糖、聚(L-赖氨酸)和靶向平滑肌细胞的多肽VAPG。其中,葡聚糖是天然中性多糖,高度亲水,生物相容性和生物降解性优异,不同于合成的聚乙二醇,葡聚糖表面含有大量羟基,易于改性。聚赖氨酸是碱性氨基酸,其侧链上的伯胺质子化后,成为结合核酸的位点,可以很好地与核酸药物结合为直径为数十纳米的纳米粒子。而且,赖氨酸是人体的必须氨基酸,因此,与其他核酸载体相比,聚赖氨酸具有更好的生物相容性和较低的细胞毒性。而VAPG多肽来源于缬氨酸-甘氨酸-缬氨酸-丙氨酸-脯氨酸-甘氨酸(VGVAPG),可以作为平滑肌细胞的生物特异性粘附配体,引导核酸药物靶向进入平滑肌细胞,提高了基因载体的转染效率,降低了与非特异性细胞接触的毒性(Gobin,A.S.;West,J.L.,Val-ala-pro-gly,an elastin-derived non-integrin ligand:Smooth muscle cell adhesion and specificity.J Biomed Mater Res A 2003,67A(1),255-259)。

本发明的技术方案如下:

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