[发明专利]一种检测遗传性耳聋基因的建库试剂盒和应用在审
| 申请号： | 201710552357.4 | 申请日： | 2017-07-07 |
| 公开（公告）号： | CN107287314A | 公开（公告）日： | 2017-10-24 |
| 发明（设计）人： | 邹婧;李全;侯强;张春杨;谭宏东 | 申请（专利权）人： | 深圳华大智造科技有限公司;华大生物科技（武汉）有限公司 |
| 主分类号： | C12Q1/68 | 分类号： | C12Q1/68;C12N15/11;C12N15/10;C40B50/06 |
| 代理公司： | 北京品源专利代理有限公司11332 | 代理人： | 巩克栋 |
| 地址： | 518083 广东省深圳*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 检测 遗传性 耳聋 基因 试剂盒 应用 | ||
1.一种检测遗传性耳聋基因的建库试剂盒，其特征在于，所述建库试剂盒包括用于扩增遗传性耳聋基因的扩增引物组；
所述扩增引物组包括根据GJB2、GJB3、SLC26A4基因和12s rRNA基因的突变位点的多态性设计的引物；
其中，所述GJB2基因包括35delG、167delT、176-191del16、299_300delAT和235delC基因；所述GJB3基因包括538C>T和547G>A；所述SLC26A4基因包括281C>T、589G>A、IVS7-2A>G、1174A>T、1226G>A、1229C>T、1975G>C、2027T>A、2162C>T、2168A>G和IVS15+5G>A；所述12s rRNA基因包括1494C>T、1555A>G和1095T>C。
2.根据权利要求1所述的建库试剂盒，其特征在于，所述扩增引物组如SEQ ID NO.1-24所示。
3.根据权利要求1或2所述的建库试剂盒，其特征在于，所述扩增引物组的每条引物的5’端加入样品标签序列。
4.根据权利要求1-3中任一项所述的建库试剂盒，其特征在于，所述样品标签序列的长度为7-10bp，优选为7bp。
5.根据权利要求1-4中任一项所述的建库试剂盒，其特征在于，所述样品标签序列如SEQ ID NO.25-120所示。
6.一种遗传性耳聋相关基因的文库构建方法，其特征在于，包括如下步骤：
采用权利要求1-5中任一项所述的建库试剂盒，在所述引物组的5’端加入建库试剂盒中所述的样品标签序列，加入反应液中对样品进行多重PCR反应，将带有不同样本标签序列的多个样本的PCR产物等比例混合成一个文库样本，得到所述遗传性耳聋相关基因的文库；
优选地，所述文库构建方法还包括如下步骤：(1)PCR产物磷酸化；(2)末端修复；(3)连接测序接头；(4)PCR扩增文库；(5)文库环化；(6)纳米球制备；(7)测序分析。
7.根据权利要求6所述的文库构建方法，其特征在于，所述多重PCR反应的体系为无核酸酶水5.5μL、PCR扩增液12.5μL、扩增引物组2μL和DNA样品5μL；
优选地，所述多重PCR反应的条件为94℃2min；94℃20s，56℃30s，60℃20s，35个循环；72℃5min；PCR产物保存在12℃。
8.一种如权利要求6或7所述的方法构建得到的遗传性耳聋相关基因的文库。
9.一种用于非诊断目的的遗传性耳聋相关基因的检测方法，其特征在于，将权利要求8所述遗传性耳聋相关基因的文库采用联合探针锚定聚合测序法进行测序。
10.权利要求1-5中任一项所述的检测遗传性耳聋基因的建库试剂盒、如权利要求8所述的文库或如权利要求9所述的检测方法用于非诊断目的的人遗传性耳聋基因的检测。
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