[发明专利]一种检测遗传性耳聋基因的建库试剂盒和应用

说明书

技术领域

本发明涉及生物检测技术领域，具体涉及一种建库试剂盒及其制备方法和应用，尤其涉及一种检测遗传性耳聋基因的建库试剂盒和应用。

背景技术

耳聋是一项非常常见的严重影响人类生活的感觉障碍性疾病，其病因复杂，单一的或者多重的基因突变极可能会导致重度耳聋，而受环境因素影响，诸如药物、创伤、极端环境暴露等，也会突发性致聋。WHO 2013年数据估计全球听力障碍人数达到3.6亿，而据2006年12月公布的全国第二次残疾人抽样调查主要数据公报结果显示，我国的语言听力障碍人数已高达2780万，新生儿中每年新增2万～3万聋儿，发病率高达1‰～3‰。

遗传性耳聋具有较高的异质性，即不同耳聋致病基因可导致相同表型的听觉功能障碍，而同一个基因的不同的突变可以引起不同的临床表型的耳聋，由此造成耳聋的病因非常复杂。因此，对致聋的遗传因素的研究成为了探究耳聋病因及有效治疗手段的突破口，而有效检测耳聋相关基因对耳聋的早期防范与治疗起到重要作用。目前已定位的致聋基因有150多种，但分子流行病学数据显示，大多数遗传性耳聋是由几个较为常见的热点突变引起的，中国人群常见耳聋突变主要包括GJB2、GJB3、SLC26A4以及线粒体的12S rRNA基因突变，在人群中的突变比例高达40％。

在常染色体隐性遗传的非综合征性耳聋中，大约有一半是由于GJB2基因突变引起的。GJB2目前报道最多的突变位点是167delT、235delC、35delG和176_191del16。大量文献显示，GJB2基因在不同种族中导致耳聋突变的位点上存在很大的差异。在欧美，特别是在北欧、南欧及美国的高加索人中，主要的突变形式是35delG，占所有GJB2突变的70％；另一个突变热点是167delT，在犹太耳聋人群中多见，占所有病理性突变的40％，35delG突变只占18％；而在亚洲人群中，则主要为235delC突变，在日本和中国，235delC位点突变在人群中的携带率为1.0％-1.3％，占所有GJB2病理性等位基因的80％。与GJB2相关的非综合征性耳聋患者一般情况多为双耳同时受累，呈对称性耳聋，多数表现为先天性耳聋，听力损失程度从轻度到极重度不等，大多数为重度和极重度耳聋，损失程度与突变的类型和位点有关，相同基因型的个体听力受损程度也存在差异，临床表现具有多态性，表明基因的表达可能受到修饰基因或者环境的影响。

GJB3基因突变可以引起常染色体显性或者隐性遗传非综合征性聋。夏家辉院士等于1998年首次在世界上成功克隆了该基因，应用荧光原位杂交技术发现GJB3定位于1p33-p35，并最早报道了两个GJB3突变位点547G＞A以及538C＞T：他们筛查了42个遗传性耳聋的家系，在浙江的一个耳聋家系中发现了一个错义突变，Cx31基因编码区的第547位碱基由G突变成A，使得连接蛋白Cx31的第183号氨基酸由谷氨酸变成了赖氨酸；同时他们还在湖南一个家系中发现了另一个突变，GJB3的第538位碱基由C变成T，导致第180号氨基酸变为终止密码子。

SLC26A4基因编码蛋白质Pendrin。Pendrin属于溶质蛋白SLC26，通过其转运功能可实现细胞内外氯/碘离子互换。SLC26A4基因突变和大前庭水管综合症以及Pendred氏综合征有关，临床表现为先天神经性耳聋伴有不同程度的语言障碍，甲状腺肿大，CT或MRI显示耳蜗发育不良，前庭导水管扩大，在中国人群的遗传性耳聋患者中突变率仅次于GJB2。到目前为止已发现了150多种SLC26A4突变类型，不同人群中突变类型和发生频率存在很大差异，IVS7-2A>G突变类型在中国大前庭水管综合症患者中最常见，有研究证明IVS7-2A＞G亦为始祖效应。

线粒体DNA(mtDNA)是唯一存在于细胞质中的DNA，由于子代的线粒体由卵细胞提供，故线粒体遗传属于母系遗传。氨基糖苷类抗生素致聋患者大部分是1555A>G、1095T>C、1494C>T突变的携带者，这些突变增加了个体对氨基糖苷类药物耳毒性的敏感性，常出现“一针致聋”的情况，通过早期基因检测，可给出临床用药建议，同时由于该突变属母系遗传，可对家系所有母系成员均起到警戒作用。

目前对于遗传性耳聋基因诊断所应用的检测方法主要有Sanger测序法、ARMS-PCR法、荧光PCR法、PCR导流杂交法、DNA微阵列技术、飞行时间质谱法等。