[发明专利]用电穿孔向细胞负载抗原

权利要求书

1.一种向抗原提呈细胞负载一个或多个抗原的方法，包括：

a)使用少于1/100克的肿瘤，制备一种包含有抗原提呈细胞和裂解物的混合物，所述裂解物具有肿瘤细胞的一个或多个抗原，其中所述抗原提呈细胞的数目大于裂解物中代表的细胞数，并且其中所述裂解物具有小于5000μg/ml的蛋白质浓度；以及

b)以足够将所述一个或多个抗原负载到所述抗原提呈细胞中的方式电穿孔所述混合物。

2.权利要求1的方法，其中所述抗原提呈细胞是树突状细胞。

3.权利要求1的方法，其中所述裂解物是使用非洗涤剂处理制备的。

4.权利要求3的方法，其中非洗涤剂处理选自由冻融法，超声波降解法，高压挤出法，固体剪切法，液体剪切法，以及低渗/高渗法组成的组。

5.权利要求1的方法，其中所述肿瘤细胞是自体的肿瘤细胞。

6.权利要求1的方法，其中所述肿瘤细胞是同种异体肿瘤细胞。

7.权利要求1的方法，其中所述肿瘤细胞进一步被定义为癌细胞。

8.权利要求7的方法，其中癌症细胞为乳癌细胞，肺癌细胞，前列腺癌细胞，卵巢癌细胞，脑癌细胞，肝癌细胞，宫颈癌细胞，结肠癌细胞，肾癌细胞，皮肤癌细胞，头颈癌细胞，骨癌细胞，食道癌细胞，膀胱癌细胞，子宫癌细胞，淋巴癌细胞，胃癌细胞，胰腺癌细胞，睾丸癌细胞，或白血病细胞。

9.权利要求1的方法，其中所述裂解物是使用洗涤剂制备的。

10.权利要求8的方法，其中所述癌细胞是肾癌细胞。

11.权利要求8的方法，其中所述癌细胞是皮肤癌细胞。

12.权利要求8的方法，其中所述癌细胞是肺癌细胞。

13.权利要求8的方法，其中所述癌细胞是乳癌细胞。

14.权利要求8的方法，其中所述癌细胞是白血病细胞。

15.权利要求8的方法，其中所述癌细胞是前列腺癌细胞。

16.权利要求1的方法，其中所述抗原提呈细胞的数目与由所述裂解物代表的细胞的数目之比在2:1到150:1之间。

17.权利要求1的方法，其中所述抗原提呈细胞的数目与由裂解物代表的细胞的数目之比在5:1到100:1之间。

18.权利要求1的方法，其中电穿孔所述混合物包括静电穿孔。

19.权利要求1的方法，其中电穿孔所述混合物包括流式电穿孔。

20.一种抗原提呈细胞在制备用于治疗或预防研究对象中的疾病的药物中的用途，其中所述抗原提呈细胞使用少于1/100克的肿瘤、使用电穿孔负载裂解物，所述裂解物具有肿瘤细胞的一个或多个抗原，其中所述裂解物具有小于5000μg/ml的蛋白质浓度，并且其中所述抗原提呈细胞的数目大于所述裂解物中代表的细胞数。

21.权利要求20的用途，进一步包括培养所述抗原提呈细胞。

22.权利要求20的用途，其中所述研究对象是哺乳动物。

23.权利要求20的用途，其中所述研究对象是人。

24.权利要求20的用途，其中所述肿瘤是癌症。

25.权利要求24的用途，其中所述癌症是乳癌，肺癌，前列腺癌，卵巢癌，脑癌，肝癌，宫颈癌，结肠癌，肾癌，皮肤癌，头颈癌，骨癌，食道癌，膀胱癌，子宫癌，淋巴癌，胃癌，胰腺癌，睾丸癌，或白血病。

26.权利要求20的用途，其中所述研究对象正在经历二级抗增生疗法。

27.权利要求26的用途，其中所述二级抗增生疗法为化疗法，放射疗法，免疫疗法，光疗法，冷冻疗法，毒素疗法，荷尔蒙疗法，或手术。

28.权利要求20的用途，其中组合物经全身性，静脉内，皮内或皮下输送。

29.权利要求20的用途，其中组合物局部输送至肿瘤体内。

30.权利要求20的用途，其中所述抗原提呈细胞包括树突状细胞。