[发明专利]一种制备B区缺失的成熟人凝血因子Ⅷ的方法在审
| 申请号： | 201710554321.X | 申请日： | 2017-07-10 |
| 公开（公告）号： | CN107142278A | 公开（公告）日： | 2017-09-08 |
| 发明（设计）人： | 尹杰超;李德山;王文飞;袁清艳;郑琦;黄涛 | 申请（专利权）人： | 东北农业大学 |
| 主分类号： | C12N15/85 | 分类号： | C12N15/85;C12N5/10;C07K14/755;A61K38/37;A61P7/04 |
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| 地址： | 150030 黑龙*** | 国省代码： | 黑龙江;23 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 制备 缺失 成熟 凝血 因子 方法 | ||
1.一种制备重组人凝血因子Ⅷ重链的表达载体，其特征在于：
(1)、该载体包含人凝血因子Ⅷ重链基因——FⅧH(B区缺失)；
(2)、人凝血因子Ⅷ重链基因FⅧH由hCMV-MIE启动子控制；
(3)、FⅧH基因表达单元含有增强其表达的相应调控元件SV40Enhancer和Intron；
(4)、引入报告基因EGFP便于利用流式细胞仪筛选；
(5)、载体的表达单元结构为如下核苷酸顺序：(SV40Enhancer)-GS-(rhCMV-MIE)–(Kappa leader-F ⅧH)-(IRES-EGFP)-polyA-Amp。
2.一种制备重组人凝血因子Ⅷ轻链的表达载体，其特征在于：
(1)、该载体包含人凝血因子Ⅷ轻链基因——FⅧL；
(2)、人凝血因子Ⅷ重链基因FⅧL由hCMV-MIE启动子控制；
(3)、FⅧL基因表达单元含有增强其表达的相应调控元件SV40Enhancer和Intron；
(4)、引入报告基因EGFP便于利用流式细胞仪筛选；
(5)、载体的表达单元结构为如下核苷酸顺序：(SV40Enhancer)-GS-(rhCMV-MIE)–(Kappa leader-F ⅧL)-(IRES-EGFP)-polyA-Amp。
3.一种高效表达重组人凝血因子Ⅷ重链的CHO-KⅠSV细胞株，其特征在于：是在CHO哺乳动物细胞系中制备出来，所述细胞含有权利要求1所述的载体或者核酸进行转染。
4.一种高效表达重组人凝血因子Ⅷ轻链的CHO-KⅠSV细胞株，其特征在于：是在CHO哺乳动物细胞系中制备出来，所述细胞含有权利要求2所述的载体或者核酸进行转染。
5.一种生产权利要求3所述高效表达重组人凝血因子Ⅷ重链的CHO-KⅠSV细胞株的方法，其特征在于：包括利用权利要求3所述宿主细胞表达重组人凝血因子Ⅷ重链。
6.一种生产权利要求4所述高效表达重组人凝血因子Ⅷ轻链的CHO-KⅠSV细胞株的方法，其特征在于：包括利用权利要求4所述宿主细胞表达重组人凝血因子Ⅷ轻链。
7.权利要求5中所生产的重组人凝血因子Ⅷ重链，其在制备药物中的应用。
8.权利要求6中所生产的重组人凝血因子Ⅷ轻链，其在制备药物中的应用。
9.一种药物组合，其特征在于：包括权利要求7重组人凝血因子Ⅷ重链和8重组人凝血因子Ⅷ轻链，其在治疗血友病中的应用。
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