[发明专利]一种不饱和脂肪酸固相微萃取方法

说明书

本发明公开了一种不饱和脂肪酸固相微萃取方法。本发明是以银纳米粒固定化整体柱作为固相微萃取整体柱，结合管内固相微萃取‑高效液相色谱联用系统，建立不饱和脂肪酸固相微萃取新方法。本发明利用整体柱表面的银纳米粒与不饱和脂肪酸碳碳双键之间的相互作用实现不饱和脂肪酸的富集；并利用银纳米粒与不饱和脂肪酸不同异构体之间作用力的不同，实现不饱和脂肪酸不同异构体的顺序洗脱。本发明方法简单，工艺巧妙，所需仪器普及度较高，易于推广，可实现不饱和脂肪酸的高效富集和不同顺反异构体的顺序洗脱，并满足反式脂肪酸高效检测要求。

技术领域

本发明属于分析化学领域，具体涉及一种不饱和脂肪酸固相微萃取方法。

背景技术

不饱和脂肪酸是食用植物油的主要组成成分，不饱和脂肪酸中所带有的碳碳双键有顺式和反式两种存在形式：顺式键形成的不饱和脂肪酸室温下是液态，反式键形成的不饱和脂肪酸室温下是固态。在现代食品工业中，为防止油脂变质和改善加工食品风味，人们对植物油进行部分氢化处理得到部分氢化植物油。部分氢化植物油中所含的大量不饱和脂肪酸都是室温下可呈现固态的反式脂肪酸（Trans-fatty acid, TFA）。因此，部分氢化油具有耐高温、不易变质、存放时间久等优点，并在蛋糕、饼干、速溶咖啡、速冻比萨饼、薯条、爆米花等食品加工过程中得到普遍使用。研究表明，食用过多的TFA会增加心血管疾病风险、降低红细胞对胰岛素的反应、促生糖尿病、升高胆固醇、导致必需脂肪酸的缺乏和影响婴幼儿的生长发育等。世界卫生组织提出TFA摄入所占能量应该控制在小于摄入食品总能量的1%。针对当前工业化食品中广泛含有TFA的现象，开发快速准确的TFA检测方法势在必行。目前，TFA检测的主要难点在于因TFA与食品中大量存在的其顺式异构体——顺式脂肪酸（Cis-fatty acid, CFA）的结构非常相近，导致其难以区分，对定性和定量分析造成较大的影响。

固相微萃取（Solid phase microextraction, SPME）是一种新型的样品前处理方法，具有简便、快速、高效、有机溶剂消耗量低、易与其他仪器联用等优点，在分析化学领域受到了广泛的关注。SPME的萃取原理是基于样品组分与固定相之间的分配平衡，因此开发新型SPME固定相成为了SPME方法的核心。据文献报道，银纳米粒与不饱和化合物所带有的碳碳双键之间存在着特殊的作用力，这种作用力随着双键数量的增加而提高，随着碳链的增长而变小，同时顺式不饱和化合物的作用力要强于反式不饱和化合物。由此启发，本课题组将银纳米粒与SPME技术相结合，制备了银纳米粒固定化SPME整体柱，并基于该整体柱，结合管内固相微萃取-高效液相色谱（In-tube SPME-HPLC）联用系统，发展一种不饱和脂肪酸固相微萃取新方法，实现不饱和脂肪酸的高效富集和不同顺反异构体的顺序洗脱，满足反式脂肪酸高效检测要求。

发明内容

本发明的目的在于提供一种不饱和脂肪酸固相微萃取新方法。本发明是以银纳米粒固定化整体柱作为固相微萃取整体柱，结合管内固相微萃取-高效液相色谱（In-tubeSPME-HPLC）联用系统，建立不饱和脂肪酸固相微萃取新方法。得益于负载的银纳米粒与不饱和脂肪酸碳碳双键之间的相互作用实现不饱和脂肪酸的富集；并利用银纳米粒与不饱和脂肪酸不同异构体之间作用力的不同，实现不饱和脂肪酸不同异构体的顺序洗脱。该固相微萃取方法可实现油酸甲酯（主要是顺-6-十八碳烯酸甲酯、反-6-十八碳烯酸甲酯、顺-9-十八碳烯酸甲酯、反-9-十八碳烯酸甲酯）、亚油酸甲酯（主要是顺-9,顺-12-十八碳二烯酸甲酯、顺-9,反-12-十八碳二烯酸甲酯、反-9,顺-12-十八碳二烯酸甲酯、反-9,反-12-十八碳二烯酸甲酯）等食品中常见不饱和脂肪酸类化合物的高效富集、顺序洗脱，并满足反式脂肪酸高效检测要求。

为实现上述目的，本发明采用如下技术方案：

一种不饱和脂肪酸固相微萃取新方法，其是以银纳米粒固定化整体柱作为固相微萃取整体柱，结合管内固相微萃取-高效液相色谱联用系统得以构建。所述的不饱和脂肪酸固相微萃取新方法，包括以下步骤：

1）银纳米粒固定化固相微萃取整体柱的制备：