[发明专利]一种羊吕氏泰勒虫和嗜吞噬细胞无浆体双重PCR专用引物及双重PCR检测方法在审
| 申请号： | 201710559840.5 | 申请日： | 2017-07-11 |
| 公开（公告）号： | CN107299154A | 公开（公告）日： | 2017-10-27 |
| 发明（设计）人： | 宁长申;闫亚群;崔艳艳;赵姗姗;王晓星;张艳;史柯;菅复春;张龙现;王荣军;景纪春 | 申请（专利权）人： | 河南农业大学 |
| 主分类号： | C12Q1/70 | 分类号： | C12Q1/70;C12Q1/68;C12Q1/04;C12N15/11 |
| 代理公司： | 郑州中原专利事务所有限公司41109 | 代理人： | 赵磊 |
| 地址： | 450002 河*** | 国省代码： | 河南;41 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 种羊 泰勒 吞噬 细胞 无浆体 双重 pcr 专用 引物 检测 方法 | ||
1.一种羊吕氏泰勒虫和嗜吞噬细胞无浆体双重PCR专用引物，其特征在于：引物的核苷酸序列为：
羊吕氏泰勒虫专用引物T.lu7：
T.lu7F：5’-TGCTGCATTGCATCTTCT-3’，
T.lu7R：5’-AGGGACGTAATCTGCACAAG-3’；
嗜吞噬细胞无浆体专用引物SSAP2：
SSAP2F：5’-GCTGAATGTGGGGATAATTTAT-3’，
SSAP2R：5’-ATGGCTGCTTCCTTTCGGTTA-3’。
2.根据权利要求1所述的羊吕氏泰勒虫和嗜吞噬细胞无浆体双重PCR专用引物，其特征在于：所述羊吕氏泰勒虫专用引物T.lu7的扩增产物大小为962bp，嗜吞噬细胞无浆体专用引物SSAP2的扩增产物大小为641bp。
3.利用权利要求1所述的羊吕氏泰勒虫和嗜吞噬细胞无浆体双重PCR专用引物进行双重PCR检测的方法，其特征在于：包括以下步骤：
(1)待测样品DNA的提取；
(2)将引物对T.lu7和SSAP2分别配置成浓度为25μM/L的溶液；
(3)以待测样品DNA为模板进行双重PCR扩增：
PCR25μL扩增反应体系为：LA Taq DNA Polymeras 0.25μL，10×LA Buffer 3.0μL，dNTP Mixture 4.0μL，T.lu7 F和T.lu7 R各0.5μL，SSAP2 F和SSAP2 R各0.5μL，DNA模板2.0μL，灭菌去离子水补足至25μL；
PCR扩增反应条件为：94℃预变性5min，94℃变性35s，55℃退火35s，72℃延伸35s，运行40个循环，72℃延伸10min；
(4)扩增产物的判定方法：PCR反应终止后，取5μL PCR产物，用1％琼脂糖电泳检测扩增结果：扩增得到962bp大小产物则判定为样品中含有羊吕氏泰勒虫，扩增得到641bp大小产物则判定为样品中含有嗜吞噬细胞无浆体。
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