[发明专利]一种里氏木霉工程菌及其制备方法与应用

权利要求书

1.一种产葡萄糖氧化酶的里氏木霉，其特征在于，所述里氏木霉含有葡萄糖氧化酶的编码基因god。

2.根据权利要求1所述的里氏木霉，其特征在于，所述里氏木霉还过表达内源的与蛋白分泌到胞外相关的蛋白的编码基因snc1。

3.根据权利要求1和/或2所述的里氏木霉，其特征在于：

所述里氏木霉含有重组质粒pRS424-cbh1P-god-cbh1T；和/或所述里氏木霉含有重组质粒pRS424-pdc1P-snc1-pdc1T；

所述重组质粒pRS424-cbh1P-god-cbh1T为将序列表中SEQ ID№：1所示核苷酸序列的第38-1787位核苷酸、SEQ ID№：2所示核苷酸序列的第26-1896位核苷酸、SEQ ID №：3所示核苷酸序列的第26-1525位核苷酸插入pRS424质粒的EcoRI酶切位点后获得的；

所述重组质粒pRS424-pdc1P-snc1-pdc1T为将序列表中SEQ ID №：5所示核苷酸序列的第26-1521位核苷酸、SEQ ID №：6所示核苷酸序列的第26-700位核苷酸、和SEQ ID №：7所示核苷酸序列的第26-1025位核苷酸插入pRS424质粒的EcoRI酶切位点后获得的。

4.一种可产葡萄糖氧化酶的里氏木霉的制备方法，其特征在于，所述方法包括：将葡萄糖氧化酶的编码基因god导入所述里氏木霉。

5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，所述方法还包括将内源的与蛋白分泌到胞外相关的蛋白的编码基因snc1导入所述里氏木霉。

6.根据权利要求4和/或5所述的方法，其特征在于：

所述导入包括将重组质粒pRS424-cbh1P-god-cbh1T导入所述里氏木霉；和/或所述导入还包括将重组质粒pRS424-pdc1P-snc1-pdc1T导入所述里氏木霉；

所述重组质粒pRS424-cbh1P-god-cbh1T为将序列表中SEQ ID №：1所示核苷酸序列的第38-1787位核苷酸、SEQ ID №：2所示核苷酸序列的第26-1896位核苷酸、SEQ ID №：3所示核苷酸序列的第26-1525位核苷酸插入pRS424质粒的EcoRI酶切位点后获得的；

所述重组质粒pRS424-pdc1P-snc1-pdc1T为将序列表中SEQ ID №：5所示核苷酸序列的第26-1521位核苷酸、SEQ ID №：6所示核苷酸序列的第26-700位核苷酸、和SEQ ID №：7所示核苷酸序列的第26-1025位核苷酸插入pRS424质粒的EcoRI酶切位点后获得的。

7.一种葡萄糖氧化酶的制备方法，其特征在于，所述方法包括下述1)-3)至少一种：

1)将葡萄糖氧化酶的编码基因god导入所述里氏木霉；

2)所述方法还包括将内源的与蛋白分泌到胞外相关的蛋白的编码基因snc1导入所述里氏木霉；

3)使里氏木霉表达导入的编码基因即得。

8.根据权利要求7所述的方法，其特征在于，所述导入包括将重组质粒pRS424-cbh1P-god-cbh1T导入所述里氏木霉；和/或所述导入还包括将重组质粒pRS424-pdc1P-snc1-pdc1T导入所述里氏木霉；

所述重组质粒pRS424-cbh1P-god-cbh1T为将序列表中SEQ ID №：1所示核苷酸序列的第38-1787位核苷酸、SEQ ID №：2所示核苷酸序列的第26-1896位核苷酸、SEQ ID №：3所示核苷酸序列的第26-1525位核苷酸插入pRS424质粒的EcoRI酶切位点后获得的；

所述重组质粒pRS424-pdc1P-snc1-pdc1T为将序列表中SEQ ID №：5所示核苷酸序列的第26-1521位核苷酸、SEQ ID №：6所示核苷酸序列的第26-700位核苷酸、和SEQ ID №：7所示核苷酸序列的第26-1025位核苷酸插入pRS424质粒的EcoRI酶切位点后获得的。