[发明专利]从杨桃根中提取α-葡萄糖苷酶抑制剂的方法

权利要求书

1.一种从杨桃根中提取α-葡萄糖苷酶抑制剂的方法，其特征在于，包括以下步骤：

1）采收杨桃根，晾干后粉碎为粗粉；

2）取杨桃根粗粉投入水中浸泡，加热至沸腾后，煎煮0.8-1.2 小时，过滤，重复以上步骤3次，得到水提取液；浓缩；再向其中加入乙醇，沉淀过夜，抽滤，取上清液，浓缩，得浓缩上清液；

3）对步骤2）得到的浓缩上清液应用色谱柱进行洗脱粗分，洗脱梯度为：水 → 第一乙醇溶液 → 第二乙醇溶液 → 第三乙醇溶液 → 第四乙醇溶液，其中乙醇浓度依次增高；然后分别浓缩，依次得到水洗脱部位浸膏1、第一乙醇洗脱部位浸膏2、第二乙醇洗脱部位浸膏3、第三乙醇洗脱部位浸膏4和第四乙醇洗脱部位浸膏5；

4）取步骤3）得到的第二乙醇洗脱部位浸膏3，应用色谱柱以氯仿-甲醇系统分7个梯度洗脱，其中，氯仿的体积分数由高至低，每个梯度洗脱三个柱体积，依次得到流份6-12；

5）对步骤4）得到的流份10进行色谱柱分离，以甲醇-水系统分9个梯度洗脱，其中，甲醇的体积分数由低至高，每个梯度洗脱三个柱体积，依次得到流份13-21；

6）对步骤5）得到的洗脱流份14进行色谱柱分离，以甲醇-水系统分7个梯度洗脱，其中，甲醇的体积分数由低至高，每个梯度洗脱三个柱体积，依次得到流份22-28；

7）对步骤6）得到的洗脱流份23进行色谱柱分离，应用色谱柱以氯仿-甲醇系统分3个梯度洗脱，其中，氯仿的体积分数由高至低，每个梯度洗脱三个柱体积，依次得到流份29-31，31号流份浓缩后干燥，即得目标产物α-葡萄糖苷酶抑制剂；

所述步骤3）中，采用以DIANION HP20树脂为填料的色谱柱对步骤2）得到的上清液进行洗脱粗分，所述第一乙醇溶液的体积分数为20%，第二乙醇溶液的体积分数为40%，第三乙醇溶液的体积分数为70%，第四乙醇溶液的体积分数为95%；

所述步骤4）中，取步骤3）得到的第二乙醇洗脱部位浸膏3，应用色谱柱以氯仿-甲醇系统梯度洗脱，具体为：取15g步骤3）得到的乙醇洗脱部位浸膏3，加少量95%乙醇溶解，用硅胶15 g拌样，干燥至恒重，用氯仿浸泡过24小时的硅胶340 g装柱，上样，然后用氯仿-甲醇系统进行梯度洗脱，共设7个梯度，即氯仿和甲醇的体积比依次为15 : 1 → 10 : 1 → 8 :1 → 6 : 1 → 4 : 1 → 2 : 1 → 1 : 1，每个梯度洗脱三个柱体积；

所述步骤5）中，对步骤4）得到的流份10进行色谱柱分离，以甲醇-水系统梯度洗脱，具体为：将步骤4）得到的流份10溶于少量50%甲醇中，用MCI Gel为填料进行装柱，上样，然后以甲醇-水系统进行梯度洗脱，共设9个梯度，即甲醇和水的体积比依次为10 : 90 → 20 :80 → 30 : 70 → 40 : 60 → 50 : 50 → 60 : 40 → 70 : 30 → 80 : 20 → 100 :0，每个梯度洗脱三个柱体积；

所述步骤6）中，对步骤5）得到的流份14进行色谱柱分离，以甲醇-水系统梯度洗脱，具体为：将步骤5）得到的流份14溶于少量50%甲醇中，用RP-18为填料进行装柱，上样，然后以甲醇-水系统进行梯度洗脱，共设7个梯度，即甲醇和水的体积比依次为10 : 90 → 20 :80 → 30 : 70 → 40 : 60 → 50 : 50 → 60 : 40 → 70 : 30，每个梯度洗脱三个柱体积；

所述步骤7）中，对步骤6）得到的流份23进行色谱柱分离，以氯仿-甲醇系统梯度洗脱，具体为：将步骤6）得到的流份23溶于甲醇中，用1 g硅胶进行拌样，干燥至恒重，用氯仿浸泡过24小时的硅胶20 g装柱，上样，然后用氯仿-甲醇系统进行梯度洗脱，共设3个梯度，即氯仿和甲醇的体积比依次为15 : 1 → 10 : 1 → 5 : 1，每个梯度洗脱三个柱体积，依次得到流份29-31，将31号流份浓缩后干燥，即得目标产物α-葡萄糖苷酶抑制剂；

所述目标产物为3,4,5-三甲氧基苯酚1-O-β-D-葡萄糖基-(1→6)-β-D-葡萄糖苷；结构式如下：

。

2.如权利要求1所述的从杨桃根中提取α-葡萄糖苷酶抑制剂的方法，其特征在于，采收杨桃根，晾干后粉碎为粗粉，粗粉的粒径为10-20目。