[发明专利]制备小鼠再细胞化肝脏的方法在审
| 申请号： | 201710562199.0 | 申请日： | 2017-07-11 |
| 公开（公告）号： | CN107201336A | 公开（公告）日： | 2017-09-26 |
| 发明（设计）人： | 温旭东;刘卫辉 | 申请（专利权）人： | 温旭东 |
| 主分类号： | C12N5/071 | 分类号： | C12N5/071 |
| 代理公司： | 成都顶峰专利事务所(普通合伙)51224 | 代理人： | 任远高 |
| 地址： | 610000 四川*** | 国省代码： | 四川;51 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 制备 小鼠 细胞 肝脏 方法 | ||
1.一种制备小鼠再细胞化肝脏的方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)在灌注系统中加入灌注液，灌注液包含：DMEM培养基，且在培养基中加入有10％胎牛血清、100U/mL青霉素、100μg/mL链霉素；
(2)将灌注液以5mL/min的速度灌注到肝脏生物支架中，灌注时间30min，其中，灌注液经门静脉注入肝脏生物支架，从肝下下腔静脉流出；
(3)停止灌注，向3mL灌注液中缓慢注入5×106个细胞，按1mL/min的速度将带有细胞的灌注液注入肝脏生物支架中；
(4)将灌注液以10mL/min的速度灌注肝脏生物支架10min；
(5)重复步骤(3)和(4)4次，即得再细胞化肝脏。
2.根据权利要求1所述的制备小鼠再细胞化肝脏的方法，其特征在于，所述肝脏生物支架的制备方法如下：
A、经离体肝脏的门静脉灌注含12.5U/ml肝素的磷酸缓冲盐溶液液体，其中，以5ml/min的速度灌注10min；
B、将离体肝脏在-80℃的条件下放置24h；
C、将冰冻肝脏在室温条件下解冻，然后将磷酸缓冲盐溶液以1ml/min的速度经门静脉灌注1h；
D、将1％的十二烷基硫酸钠溶液以5ml/min的速度经门静脉灌注1h；
E、将1％的聚乙二醇辛基苯基醚溶液与0.1％的胰蛋白酶以5ml/min的速度经门静脉灌注2h；
F、将磷酸缓冲盐溶液以5ml/min的速度经门静脉灌注2h；
G、将含有青链霉素的磷酸缓冲盐溶液以5ml/min的速度经门静脉灌注20min，即得肝脏生物支架。
3.根据权利要求2所述的制备小鼠再细胞化肝脏的方法，其特征在于，步骤G还包括用含青链霉素的磷酸缓冲盐溶液冲洗肝脏表面。
4.根据权利要求2所述的制备小鼠再细胞化肝脏的方法，其特征在于，每次灌注均是以肝下下腔静脉作为液体的出口。
5.根据权利要求2所述的制备小鼠再细胞化肝脏的方法，其特征在于，每次灌注均通过在离体肝脏门静脉中置管的方式进行灌注。
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