[发明专利]一种利用胃磨鉴定虾蟹类年龄的方法

说明书

技术领域

本发明属于水产学领域，具体地，公开了一种利用胃磨鉴定虾蟹类年龄的方法，该方法涉及虾蟹类胃磨生长纹的观测。

背景技术

虾蟹类隶属于节肢动物门、甲壳纲、十足目，绝大多数种类寿命在1～10岁之间，它们是重要的海洋经济种类，广泛分布于世界各大洋和南、北极等海域。年龄鉴定是渔业生物学研究的重要内容，通过对水生生物年龄的鉴定，有助于掌握其生活史和估算其种群数量，为渔业资源管理提供基础信息。

对于大部分野生水生生物，一般都可以通过硬组织中的生长纹来直接获得其年龄信息，如鱼类的鳍条、脊椎骨等，头足类的耳石、角质颚和内壳等。早期的研究中，大部分学者使用饲养、标记重捕、体长频度、脂褐素分析和放射性同位素分析等方法来鉴定甲壳类的年龄，但这些方法均存在一些不足。此外，与鱼类和头足类不同，甲壳类动物是通过脱壳过程得以生长，因此能记录年龄信息的钙化结构周期性的消失，给直接鉴定其年龄带来一定的困难。

胃磨是虾蟹类脱壳时仍会保留的少数硬组织之一，本领域至今未见利用胃磨来研究虾蟹类的年龄的报道。本发明通过直接读取胃磨生长纹数目来鉴定虾蟹类的年龄，为直接鉴定虾蟹年龄提供了一个新的有效的方法。

发明内容

本发明要解决的技术问题是，针对现有技术中鉴定虾蟹类年龄的不足与困难，提供了一种有效的直接鉴定虾蟹年龄的方法。

为解决上述问题，本发明提供了一种利用胃磨鉴定虾蟹类年龄的方法，其特征在于：包括如下步骤：

(1)标记：选取轭贲门骨，按照图1在第1齿与近端1/2处画一条切割线；

(2)包埋：将画有切割线的轭贲门骨平放于磨具中，倒入压克力粉和液体固化剂混合配置成的树脂溶液，使溶液覆盖整个模具，然后放置室温避光处待其硬化；

(3)切割：将包埋硬化后的树脂块以切割线为中心，将两侧多余的部分切除；

(4)固定：将切割后的树脂薄片一侧朝下，固定在载玻片上；

(5)打磨：将固定在载玻片上的树脂薄片另一侧打磨，先后以120、600、1200、2500目的水磨砂纸，先粗磨后细磨至切割线表面；

(6)抛光：将经打磨的树脂薄片抛光研磨面，除去油质和杂质，完成所述树脂薄片一面的研磨；

(7)将以上抛光好的树脂薄片连同载玻片放在加热台上加热直至树脂软化，取下树脂薄片，干燥后，将树脂薄片翻面，固定在载玻片上，然后重复(5)和(6)步骤直至截面的生长纹清晰可见；

(8)生长纹观察：计数钙化层内生长纹的数目。

进一步地，在步骤(1)标记之前对胃磨进行预处理，包括如下步骤：

(1)提取：揭开虾蟹类的头胸甲，将其整个胃取出，用手术剪刀剪开胃取出胃磨；

(2)清洗：用手术剪刀剪开胃磨并展开，用清水将胃磨表面清洗干净；

(3)去除结缔组织：用解剖剪刀和尖头镊子剔除与胃磨骨骼相连的结缔组织剔除；

(4)保存：将经步骤(3)处理的胃磨在-20℃下冷冻保存。

进一步地，在所述步骤(8)中的生长纹计数步骤为：

(1)图片制作：将制作好切片置于载玻片上，用胶头滴管滴上清水；在连接有CCD的显微镜100×倍下对胃磨的生长纹进行拍照，用图像处理软件对所拍的图片分别进行拼图处理；

(2)生长纹计数：对100×倍下采集的图像对钙化层的生长纹进行数目计数。

在一些实施方案中，在步骤(1)中用翼贲门骨或中贲门骨作为材料按照图1选取研磨平面，然后完成包埋、切割、固定、打磨、抛光和实施后续步骤。

优选地，所述的磨具是塑料模具。

优选地，述压克力粉和液体固化剂的配置体积比为1:1-1:1.5。

定义：

“虾蟹”，是节肢动物的另一家族，属于甲壳纲的十足目。这类动物与人类有着十分密切的关系，有些是主要的水产养殖或捕捞对象，其中尤以虾、龙虾和蟹等，在海洋渔业捕获物中产量相当大，特别是对虾、毛虾、梭子蟹等，营养丰富，产值很高，地位更为重要。我国的虾蟹种类非常多，通过大量的调查研究，目前已发现的约有1000多种，其中虾类400多种，蟹类600多种。根据本发明的教导，本领域技术人员能将本发明方法运用于任何虾蟹类生物，因此本发明不限于任何具体的虾蟹类生物。

“胃磨(gastric mill)”，即所谓咀嚼胃，其内面的角质层在一定部位形成胃齿、突出于胃腔内，基于肌肉的控制可将食物磨碎。胃壁上的这种咀嚼结构称为胃磨。