[发明专利]一种高尔基银染神经组织的冰冻切片方法

说明书

本发明公开了一种高尔基银染神经组织的冰冻切片方法，包括以下步骤：(1)配制高尔基银染溶液；(2)将待染色的神经组织浸泡在步骤(1)所述高尔基银染溶液中；(3)将浸泡好的神经组织置于含甘油10％～20％V/V、含蔗糖15％～20％W/V的甘油‑蔗糖混合溶液中进行脱水；(4)利用冰冻切片机将脱水后的神经组织进行切片。该冰冻切片方法采用含甘油10％～20％V/V、含蔗糖15％～20％W/V的甘油‑蔗糖混合溶液对银染神经组织进行脱水处理，降低了神经组织的硬度和脆性，增强了其韧性，所制得的神经组织切片质量好，切片完整，有效减少了切片破碎和粘刀的情况，并且成本低，不影响组织显影。

技术领域

本发明涉及神经病理学组织切片技术领域，具体涉及一种高尔基银染神经组织的冰冻切片方法。

背景技术

已有的科学研究表明，神经元是大脑神经系统的结构单位和功能单位。神经元的基本结构包括细胞体和突起两部分；神经元的突起一般包括一条长而分支少的轴突和数条短而呈树枝状分支的树突；树突和轴突具有接受刺激并将冲动传入细胞体的功能。神经元由树突间神经突触连接构筑了复杂的神经网络，并由此来传递神经信号。

树突表面可见许多棘状突起，长约0.5μm～1.0μm，粗约0.5μm～2.0μm，称树突棘，是形成突触的部位，与突触可塑性直接相关。神经元结构中的胞体位置、树突以及树突棘形态和分布，是描述神经元的重要参数。观察神经元的树突及树突棘结构的改变，有助于深入地理解脑结构，对解释大脑复杂的功能基础和神经疾病的病变机理提供了直接证据。

在组织学染色领域，高尔基银染法是目前应用最为广泛的一种观察神经元形态的染色方法，可以用来分析神经元的树突结构和树突棘形态。其结果稳定，可重复性好，染色清晰，并且组织切片厚度在200μm左右时可以清晰的显示整个神经元树突的形态。

但是，该方法处理后的神经组织通常硬而脆，冰冻切片过程容易成碎片，通常需要使用振动切片。而振动切片相对于冰冻切片而言，不仅切片速度慢，存在刀痕而导致切片质量较差，而且应用范围窄，仅能对部分类型的组织标本进行切片，相当多种类的组织仍不能进行振动切片，需要冰冻切片。因此，目前装备有振动切片机的单位或实验室很少，而几乎所有的病理检查实验室或单位均装备有冰冻切片机。没有装备振动切片机的单位或实验室如果进行高尔基染色，只能购买成品的试剂盒，如FD公司和Hito公司提供可冰冻切片的高尔基银染试剂盒，但是售价昂贵，染色成本高。

发明内容

本发明的目的在于，克服以上背景技术中提到的不足和缺陷，提供一种切片质量好、成本低的高尔基银染神经组织的冰冻切片方法。

为解决上述技术问题，本发明提出的技术方案为：

一种高尔基银染神经组织的冰冻切片方法，包括以下步骤：

(1)配制高尔基银染溶液；

(2)将待染色的神经组织浸泡在步骤(1)所述高尔基银染溶液中；

(3)将浸泡后的神经组织置于含甘油10％～20％(V/V)、含蔗糖15％～20％(W/V)的甘油-蔗糖混合溶液中进行脱水；

(4)利用冰冻切片机将脱水后的神经组织进行切片。