[发明专利]一株嗜酸乳杆菌及其在发酵产抑菌多肽中的应用

说明书

本发明公开了一株嗜酸乳杆菌及其在发酵产抑菌多肽中的应用，所述菌株分类命名为嗜酸乳杆菌（Lactobacillus acidophilus）YHC‑049，已保藏于中国典型培养物保藏中心CCTCC，保藏编号：CCTCC NO：M 2017415。所述菌株采用的是离子注入诱变目标菌株单倍体，同时诱导原生质体融合，再根据离子注入诱变的特殊性采用流式细胞仪高效筛选重组菌株，所得菌株综合了嗜酸乳杆菌YHC29生长快、嗜酸乳杆菌YHC83产量高的优势，大幅度提高发酵液中抑菌多肽的产量，并且遗传稳定性好，抑菌多肽效价约在2500AU/ml，处于业内领先水平。

技术领域

本发明涉及一株嗜酸乳杆菌及其在发酵产抑菌多肽中的应用，属于微生物发酵技领域。

背景技术

抑菌多肽是嗜酸乳杆菌产生的一种多肽物质，由34个氨基酸残基组成，分子量约为3500 Da。抑菌多肽可抑制大多数革兰氏阳性细菌，并对芽孢杆菌的孢子有强烈的抑制作用。食用后在人体的生理pH条件和α—胰凝乳蛋白酶作用下很快水解成氨基酸，不会改变人体肠道内正常菌群以及产生如其它抗菌素所出现的抗性问题，更不会与其它抗菌素出现交叉抗性，是一种高效、无毒、安全、无副作用的天然食品抑菌剂。

我国开发研究抑菌多肽已有多年历史,例如中国科学院微生物研究所就在进行新抗菌多肽生物合成基因的研究（2017年自然科学基金项目），那淑敏等也发现嗜酸乳杆菌中产生微量抑菌多肽，目前国内抑菌多肽效价水平约在1000AU/ml; 国外虽然有研究报道,产量基本维持在较低水平。本发明采用糖蜜、玉米浆等工业废弃物原料，抑菌多肽效价约在2500AU/ml，处于业内领先水平。

经过相关文献、专利的检索，国内外利用这一思路筛选嗜酸乳杆菌发酵产抑菌多肽的相关技术和方法尚无报道。

发明内容

本发明的目的是提供一株嗜酸乳杆菌及其在发酵产抑菌多肽中的应用，该嗜酸乳杆菌生物量多，产量高，发酵周期缩短到24h。

为了达到上述目的，本发明采用的技术方案如下：

一株嗜酸乳杆菌，分类命名为嗜酸乳杆菌（Lactobacillus acidophilus）YHC-049，已于2017年 7月 7日保藏于中国典型培养物保藏中心CCTCC，地址：中国 武汉 武汉大学，保藏编号：CCTCC NO：M 2017415。

本发明所述的嗜酸乳杆菌的筛选方法是：将实验室保存的嗜酸乳杆菌YHC83和嗜酸乳杆菌YHC29分别培养后用常规方法进行单倍体分离，再对单倍体悬浮液进行低能氮离子注入，进行细胞内DNA染色，经过温育培养半小时后通过流式细胞仪筛选融合菌株，再通过摇瓶发酵筛选获取出发菌株，再对出发菌株进行低能氮离子注入诱变，最后筛选出符合工业应用的目标菌株。

嗜酸乳杆菌YHC29生长快，发酵周期短，嗜酸乳杆菌YHC83产量高，本发明将两者融合，得到目标菌株。

本发明菌株的形态学及生理化学特征如下：

菌落颜色：白色

需氧方式：兼性厌氧

菌落大小：10~20μm

适宜生长温度：30℃~35℃

适宜生长pH：6~7

菌落形态：卵圆形

革兰氏染色：阳性。

本发明所提供的融合嗜酸乳杆菌筛选诱变方法，具体步骤如下

（a)、单倍体细胞悬浮液制备：分别将嗜酸乳杆菌YHC83和嗜酸乳杆菌YHC29制成单倍体细胞悬液，调整浓度为10⁷/毫升。