[发明专利]用于检测碱性磷酸酶的修饰电极及制备方法与检测方法

权利要求书

1.一种用于检测碱性磷酸酶的修饰电极的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：

步骤（1），将浓度为1.8-2.2mg/mL羧基化多壁碳纳米管的DMF溶液与浓度为1.9-2.1mg/mL聚乙烯亚胺的超纯水溶液等体积混合均匀，得到修饰溶液；

步骤（2），取修饰溶液滴涂于干净的电极表面，修饰溶液的用量为0.7-0.75µL/mm²，室温下晾干后，用超纯水冲洗，得到聚乙烯亚胺功能化的多壁碳纳米管修饰的电极；

步骤（3），将聚乙烯亚胺功能化的多壁碳纳米管修饰的电极置于4.9-5.1mmol/L的氯金酸水溶液中，在-0.2V的恒电位下沉积58-62s，即得到用于检测碱性磷酸酶的修饰电极。

2.根据权利要求1所述的用于检测碱性磷酸酶的修饰电极的制备方法，其特征在于，所述的电极为玻碳电极。

3.根据权利要求1所述的用于检测碱性磷酸酶的修饰电极的制备方法，其特征在于，干净的电极的制备方法是：将电极在三氧化二铝中抛光至镜面，之后依次用无水乙醇超声清洗半分钟，再用蒸馏水超声清洗半分钟两次，接着将电极置于含有铁氰化钾和亚铁氰化钾的磷酸缓冲溶液中，在-0.2V~0.6V的电势范围内进行循环伏安扫描，相邻电势差在80mV以下，表明电极清洗干净；

所述的含有铁氰化钾和亚铁氰化钾的磷酸缓冲溶液包括1mmol/L铁氰化钾、1mmol/L亚铁氰化钾以及pH为7.0的0.1mol/L磷酸缓冲液。

4.权利要求1-3任意一项所述的用于检测碱性磷酸酶的修饰电极的制备方法制得的修饰电极。

5.一种检测碱性磷酸酶的方法，采用权利要求1-3任意一项所述的用于检测碱性磷酸酶的修饰电极的制备方法制得的修饰电极，其特征在于，包括如下步骤：

步骤（1），将待测碱性磷酸酶溶液按体积比为1:0.95-1.05加入到含有抗坏血酸2-磷酸酯和硝酸银的二乙醇胺-硝酸缓冲溶液中，得到反应液；

所述的含有抗坏血酸2-磷酸酯和硝酸银的二乙醇胺-硝酸缓冲溶液含有：4mmol/L抗坏血酸2-磷酸酯、1mmol/L硝酸银、1mmol/L MgSO₄、1mol/L二乙醇胺，溶剂为水，pH为9.8；

步骤（2），将修饰电极插入反应液中，于37℃避光反应38-42分钟，然后依次采用1mol/LTris水溶液和超纯水将修饰电极冲洗干净，最后将修饰电极放入1mol/L KCl水溶液中进行线性伏安扫描测定，根据检测到的电化学信号的强弱采用标准曲线法对碱性磷酸酶进行定量。

6.根据权利要求5所述的检测碱性磷酸酶的方法，其特征在于，在检测碱性磷酸酶的方法的步骤（2）中，扫描范围为-0.1~0.3V，扫描速率为100mV/s。

7.根据权利要求5所述的检测碱性磷酸酶的方法，其特征在于，待扫描测定完后，将修饰电极置于0.5mol/L的硫代硫酸钠水溶液中浸泡5~10min后，取出用超纯水冲洗干净，之后修饰电极用于下一个样品的检测。