[发明专利]用于检测碱性磷酸酶的修饰电极及制备方法与检测方法

说明书

本发明涉及一种用于检测碱性磷酸酶的修饰电极及制备方法与检测方法，属于分析检测技术领域。本发明首先制备修饰电极，然后利用碱性磷酸酶催化其底物抗坏血酸2‑磷酸酯脱去磷酸根生成具有强还原性的抗坏血酸，而抗坏血酸可以迅速将反应液中的银离子还原为银单质，并沉积电极表面上，最后利用修饰电极表面所沉积银的溶出伏安信号来实现对碱性磷酸酶的高灵敏检测。检测完成以后还可以通过简单的方法使修饰电极得到再生，以便能够重复利用。该方法将酶促金属化反应和电化学溶出伏安检测法相结合，具有非常高的检测灵敏度和抗干扰能力，具有操作简单，特异性强，灵敏度高且不需要复杂仪器的优点，可以应用于血清样品中碱性磷酸酶的高灵敏检测。

技术领域

本发明属于分析检测技术领域，具体涉及一种用于检测碱性磷酸酶的修饰电极及制备方法与检测方法。

背景技术

科学研究证明碱性磷酸酶在血清中含量的变化可以用来诊断某些疾病如肝炎、肝功能障碍、肝硬化、骨质疏松症、内分泌疾病、脑瘤、前列腺癌、骨癌和其他疾病等。因此，构建灵敏度高和选择性好的检测碱性磷酸酶的分析方法在医疗应用领域具有非常重要的意义。到目前为止，科研工作者开发了许多方法用于碱性磷酸酶的检测，如比色法、荧光分析法、化学发光法和表面增强拉曼散射（SERS）法。然而，这些方法都存在一定的缺陷，如繁琐的样品处理步骤和复杂的反应机制，同时还通常需要复杂的外部仪器和复杂操作，这不仅增加了检测的复杂性，还增加了检测成本和时间。因此如何克服现有技术的不足是目前分析检测技术领域亟需解决的问题。

发明内容

本发明的目的是为了解决现有技术的不足，提供一种用于检测碱性磷酸酶的修饰电极及制备方法与检测方法，该电极可以作为工作电极，结合酶促金属化反应及电化学溶出伏安检测手段，建立一种快速、高灵敏检测碱性磷酸酶的方法。

为实现上述目的，本发明采用的技术方案如下：

一种用于检测碱性磷酸酶的修饰电极的制备方法，包括如下步骤：

步骤（1），将浓度为1.8-2.2mg/mL羧基化多壁碳纳米管的DMF溶液与浓度为1.9-2.1mg/mL聚乙烯亚胺的超纯水溶液等体积混合均匀，得到修饰溶液；

步骤（2），取修饰溶液滴涂于干净的电极表面，修饰溶液的用量为0.7-0.75µL/mm²，室温下晾干后，用超纯水冲洗，得到聚乙烯亚胺功能化的多壁碳纳米管修饰的电极；

步骤（3），将聚乙烯亚胺功能化的多壁碳纳米管修饰的电极置于4.9-5.1mmol/L的氯金酸水溶液中，在-0.2V的恒电位下沉积58-62s，即得到用于检测碱性磷酸酶的修饰电极。

进一步，优选的是，所述的电极为玻碳电极。但不限于此，如常规的金电极、丝网印刷电极都可以。

进一步，优选的是，干净的电极的制备方法是：将电极在三氧化二铝中抛光至镜面，之后依次用无水乙醇超声清洗半分钟，再用蒸馏水超声清洗半分钟两次，接着将电极置于含有铁氰化钾和亚铁氰化钾的磷酸缓冲溶液中，在-0.2V~0.6V的电势范围内进行循环伏安扫描，电势差在80mV以下，表明电极清洗干净；

所述的含有铁氰化钾和亚铁氰化钾的磷酸缓冲溶液包括1mmol/L铁氰化钾、1mmol/L亚铁氰化钾以及pH为7.0的0.1mol/L磷酸缓冲液。

本发明还提供上述用于检测碱性磷酸酶的修饰电极的制备方法制得的修饰电极。

本发明另外提供一种检测碱性磷酸酶的方法，采用上述用于检测碱性磷酸酶的修饰电极的制备方法制得的修饰电极，包括如下步骤：

步骤（1），将待测碱性磷酸酶溶液按体积比为1:0.95-1.05加入到含有抗坏血酸2-磷酸酯和硝酸银的二乙醇胺-硝酸缓冲溶液中，得到反应液；