[发明专利]一种用于细胞培养的合成粘附培养基及其制备方法有效
申请号: | 201710574387.5 | 申请日: | 2017-07-14 |
公开(公告)号: | CN107119010B | 公开(公告)日: | 2020-08-18 |
发明(设计)人: | 沈德良;张金盈;梁红霞;唐俊楠;王勃;李静;赵红霞;刘闯;王佩文;靳之;崔新月 | 申请(专利权)人: | 郑州大学第一附属医院 |
主分类号: | C12N5/077 | 分类号: | C12N5/077;C12N5/0775;C12N5/0735 |
代理公司: | 西安铭泽知识产权代理事务所(普通合伙) 61223 | 代理人: | 俞晓明 |
地址: | 450052*** | 国省代码: | 河南;41 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 一种 用于 细胞培养 合成 粘附 培养基 及其 制备 方法 | ||
1.一种用于细胞培养的合成粘附培养基,其特征在于,每升合成粘附培养基中含有以下组分:生物素0.08g、皮质酮20μg、L-肉毒碱2g、亚油酸1.2g、乙醇胺1.2g、亚麻酸0.8g、D-葡萄糖13-17g、孕酮5μg、丙酮酸钠1.2g、视黄醇乙酸酯0.08g、过氧化氢酶4g、叶酸0.9-1.2g、还原型谷胱甘肽0.8-1.3g、硫辛酸60-70μg、转铁蛋白2-3g、人胰岛素6-8g、亚硒酸钠0.1mg、香蕉皮提取物500-600mL、萘乙酸1.2-2g、维生素C 0.8-1.5g;
所述香蕉皮提取物是香蕉皮115℃下焙炒10-20min后,再经含有维生素B12和维生素B1的溶液浸泡、过滤收集得到的滤液;
所述细胞为人体心脏组织细胞、人体骨髓干细胞或者小鼠胚胎干细胞。
2.根据权利要求1所述的用于细胞培养的合成粘附培养基,其特征在于,每升合成粘附培养基中含有以下组分:生物素0.08g、皮质酮20μg、L-肉毒碱2g、亚油酸1.2g、乙醇胺1.2g、亚麻酸0.8g、D-葡萄糖15g、孕酮5μg、丙酮酸钠1.2g、视黄醇乙酸酯0.08g、过氧化氢酶4g、叶酸1g、还原型谷胱甘肽1.0g、硫辛酸65μg、转铁蛋白2.5g、人胰岛素7g、亚硒酸钠0.1mg、香蕉皮提取物550mL、萘乙酸1.5g、维生素C1.2g。
3.根据权利要求1所述的用于细胞培养的合成粘附培养基的制备方法,其特征在于,具体包括以下步骤:
步骤1,制备香蕉皮提 取物
步骤1.1,收集新鲜的香蕉皮,115℃下焙炒10-20min,得到碳化香蕉皮;
步骤1.2,按以下配方制备浸泡液,其中每升浸泡液中含有以下组分:0.3-0.5g的维生素B12、1-2g的维生素B1,余量为蒸馏水;
步骤1.3,将所述碳化香蕉皮与浸泡液按照1:10的质量比例混合,超声提取30-50min,然后经孔直径为1-3μm的滤纸过滤,得到香蕉皮提 取物;
步骤2,每升用于细胞培养的合成粘附培养基按照以下步骤制备:
步骤2.1,称取生物素0.08g、皮质酮20μg、L-肉毒碱2g、亚油酸1.2g、乙醇胺1.2g、亚麻酸0.8g、D-葡萄糖13-17g、孕酮5μg、丙酮酸钠1.2g、视黄醇乙酸酯0.08g、过氧化氢酶4g、叶酸0.9-1.2g、还原型谷胱甘肽0.8-1.3g、硫辛酸60-70μg、转铁蛋白2-3g、人胰岛素6-8g、亚硒酸钠0.1mg、香蕉皮提取物500-600mL、萘乙酸1.2-2g、维生素C 0.8-1.5g;
步骤2.2,将步骤2.1中称取的各组分混合后,震荡搅拌,充分溶化各组分,然后将得到的溶液经孔直径为0.22μm的滤菌膜过滤除菌,得到用于细胞培养的合成粘附培养基。
4.根据权利要求3中所述的用于细胞培养的合成粘附培养基的制备方法,其特征在于,所述超声提取的超声波频率为20kHz,功率为500W。
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