[发明专利]一种用于细胞培养的合成粘附培养基及其制备方法

说明书

本发明公开了一种用于细胞培养的合成粘附培养基，每升合成粘附培养基中含有以下组分：生物素0.08g、皮质酮20μg、L‑肉毒碱2g、亚油酸1.2g、乙醇胺1.2g、亚麻酸0.8g、D‑葡萄糖13‑17g、孕酮5μg、丙酮酸钠1.2g、视黄醇乙酸酯0.08g、过氧化氢酶4g、叶酸0.9‑1.2g、还原型谷胱甘肽0.8‑1.3g、硫辛酸60‑70μg、转铁蛋白2‑3g、人胰岛素6‑8g、亚硒酸钠0.1mg、香蕉皮提取物500‑600mL、萘乙酸1.2‑2g、维生素C 0.8‑1.5g。本发明提供的一种用于细胞培养的合成粘附培养基及其制备方法，不含动物血清，大幅度的缩短的干细胞分化培养的时间，节约了实验成本。

技术领域

本发明属于细胞培养技术领域，具体涉及一种用于细胞培养的合成粘附培养基及其制备方法。

背景技术

动物细胞培养，尤其是干细胞培养一直是医学疾病研究领域的基本实验手段之一，干细胞既可以自我复制更新，也有潜力分化为其他类型的细胞，所以，其在疑难疾病的治疗领域具有良好的应用前景。干细胞培养过程中需要依赖特殊的培养环境，要求达到干细胞贴壁培养或者增殖效果。

由于干细胞的培养通源于少数细胞的接种，初始接种量不多，所以，目前干细胞的培养主要采用的是含有胎牛血清和氨基酸的培养基，通过胎牛血清对干细胞的刺激，以达到使干细胞快速分裂分化的目的，然而应用这些细胞培养基扩增、分化干细胞需要经过一个漫长的过程，常常需要数周的时间，再者胎牛血清的提取需要经过复杂的工序，实验成本高，因此有必要开发一种新的培养基，以快速促进细胞培养。

发明内容

本发明提供的一种用于细胞培养的合成粘附培养基及其制备方法，不含动物血清，且大幅度的缩短的干细胞分化培养的时间，节约了实验成本。

本发明的第一个目的是提供一种用于细胞培养的合成粘附培养基，每升合成粘附培养基中含有以下组分：生物素0.08g、皮质酮20μg、L-肉毒碱2g、亚油酸1.2g、乙醇胺1.2g、亚麻酸0.8g、D-葡萄糖13-17g、孕酮5μg、丙酮酸钠1.2g、视黄醇乙酸酯0.08g、过氧化氢酶4g、叶酸0.9-1.2g、还原型谷胱甘肽0.8-1.3g、硫辛酸60-70μg、转铁蛋白2-3g、人胰岛素6-8g、亚硒酸钠0.1mg、香蕉皮提取物500-600mL、萘乙酸1.2-2g、维生素C0.8-1.5g；

所述香蕉皮提取物是香蕉皮115℃下焙炒10-20min后，再经含有维生素B12和维生素B1的溶液浸泡、过滤收集得到的滤液。

优选的，上述用于细胞培养的合成粘附培养基中，每升合成粘附培养基中含有以下组分：生物素0.08g、皮质酮20μg、L-肉毒碱2g、亚油酸1.2g、乙醇胺1.2g、亚麻酸0.8g、D-葡萄糖15g、孕酮5μg、丙酮酸钠1.2g、视黄醇乙酸酯0.08g、过氧化氢酶4g、叶酸1g、还原型谷胱甘肽1.0g、硫辛酸65μg、转铁蛋白2.5g、人胰岛素7g、亚硒酸钠0.1mg、香蕉皮提取物550mL、萘乙酸1.5g、维生素C1.2g。

本发明还提供了一种用于细胞培养的合成粘附培养基的制备方法，具体包括以下步骤：

步骤1，制备香蕉提皮取物

步骤1.1，收集新鲜的香蕉皮，115℃下焙炒10-20min，得到碳化香蕉皮；

步骤1.2，按以下配方制备浸泡液，其中每升浸泡液中含有以下组分：0.3-0.5g的维生素B12、1-2g的维生素B1，余量为蒸馏水；

步骤1.3，将所述碳化香蕉皮与浸泡液按照1:10的质量比例混合，超声提取30-50min，然后经孔直径为1-3μm的滤纸过滤，得到香蕉提皮取物；

步骤2，每升用于细胞培养的合成粘附培养基按照以下步骤制备：