[发明专利]一种利用鱼卵母细胞提取物诱导成纤维细胞重编程为成骨细胞样细胞的试剂盒及方法

权利要求书

1.一种利用鱼卵母细胞提取物诱导成纤维细胞重编程为成骨细胞样细胞的试剂盒，其特征在于该试剂盒的成份包括：鱼卵母细胞提取物、基础培养基、胎牛血清、青霉素和链霉素、抗坏血酸、β-甘油磷酸钠、地塞米松、茜素红染液。

2.一种采用权利要求1所述一种利用鱼卵母细胞提取物诱导成纤维细胞重编程为成骨细胞样细胞的试剂盒，其特征在于，鱼卵母细胞提取物蛋白浓度为10mg/ml，成骨细胞诱导分化培养基包含下列成份：基础培养基，10%的胎牛血清，10nmol/L的地塞米松，50μmol/L的抗坏血酸，10mmol/L的β-甘油磷酸钠，100U/ml的青霉素和100mg/L的链霉素。

3.一种利用鱼卵母细胞提取物诱导成纤维细胞重编程为成骨细胞样细胞的方法，其特征在于包括如下步骤：

（1）成纤维细胞的制备，包括成纤维细胞的分离、鉴定和培养；

（2）鱼卵母细胞提取物的制备，包括低温条件下鱼卵母细胞的研磨、过滤和蛋白浓度检测；

（3）成纤维细胞的鱼卵母细胞提取物诱导，利用所述步骤（2）中制备的鱼卵母细胞提取物对所述步骤（1）中制备的成纤维细胞进行诱导；

（4）诱导成纤维细胞的成骨细胞样细胞诱导，利用权利要求1中所述试剂盒成份和权利要求2中所述培养基成份对步骤（3）中诱导的成纤维细胞进行成骨细胞样细胞诱导；

（5）成骨细胞样细胞的鉴定，利用权利要求1中所述试剂盒成份茜素红进行成骨细胞样细胞的鉴定。

4.一种采用权利要求3所述一种利用鱼卵母细胞提取物诱导成纤维细胞重编程为成骨细胞样细胞的方法，其特征在于，步骤（3）中使用的鱼卵母细胞提取物浓度为10~20μg/ml，诱导时间为72小时。

5.一种采用权利要求3所述一种利用鱼卵母细胞提取物诱导成纤维细胞重编程为成骨细胞样细胞的方法，其特征在于，步骤（4）中诱导时间为21天。

6.一种采用权利要求3所述一种利用鱼卵母细胞提取物诱导成纤维细胞重编程为成骨细胞样细胞的方法，其特征在于，步骤（5）中使用的茜素红浓度为0.1%，pH值为4.2。