[发明专利]一种常绿木本植物基因组DNA的提取试剂盒及提取方法

说明书

本发明涉及一种常绿木本植物基因组DNA的提取试剂盒及提取方法，属于基因工程领域，试剂盒包括漂洗液、裂解液、抽提液A、抽提液B、结合缓冲液、过柱缓冲液、洗脱缓冲液和吸附柱，还包括助研剂；助研剂中包括不溶性PVPP、石英砂和抗坏血酸；漂洗液中包含Tris‑HCl，EDTA‑Na2，NaCl，KAc，葡萄糖，PVP，抗坏血酸和PEG；裂解液的成分包括CTAB，Tris‑HCl，EDTA‑Na2，NaCl，山梨醇，硼砂，PVP，抗坏血酸和蛋白酶K。该方法操作灵活、快速，成本低，适用面广，对次生代谢物和细胞中其他干扰物质去除较彻底，提取的基因组质量好，纯度高，蛋白污染少。

技术领域

本发明属于基因工程技术领域，涉及植物基因组DNA的提取，具体地，涉及一种常绿木本植物基因组DNA的提取试剂盒及提取方法。

背景技术

常绿植物是指一年四季均长有绿叶的植物。这类植物由于具有四季常青的特性，可以有效提高城市园林绿化的质量，增强园林绿化的美感，同时在维护生态系统的平衡中发挥着重要作用，因此常被用作绿化的首选植物。常绿木本植物树种多树体高大、干形通直圆满，是建筑、造纸和板材等生产的重要原材料。其中部分科属的植物是研究植物起源、发育、进化不可缺少的珍贵材料，科学研究价值极高。但由于滥砍滥伐和生态环境的恶化，以及自身繁殖能力衰退等因素影响，常绿木本植物中有不少种类已处于渐危、濒危和极危的状态。因此，加强这类植物的研究，采取有效的保护措施迫在眉睫。

DNA提取是植物分子生物学的基础技术，纯度高、完整性好的DNA是进行分子杂交、基因克隆、文库构建和基因组测序等分子操作的前提。理想的DNA提取方法应满足以下几个主要条件：获得的DNA纯度高、完整性好、提取的量要充足、操作简便、省时、成本低。尽管从有机体中提取DNA已成为分子生物学实验室中的一项常规技术，但植物组织的组分复杂，不同的植物材料的组分各异，特别是多年生常绿木本植物如松柏科植物、木兰科植物等，因细胞壁较厚、代谢旺盛，细胞中含有大量的多糖、多酚等次生代谢物质，并且叶子表面革质化，常被分子生物学研究人员称为“顽执植物”（recalcitrant plant），如何去除这些杂质获得高质量的DNA，是这类植物研究的面临的首要问题。

发明内容

针对上述常绿木本植物基因组DNA提取方面面临的问题，本发明的目的在于提供一种常绿木本植物基因组DNA的提取试剂盒，以及一种提取方法，对次生代谢物和细胞中其他干扰物质去除较为彻底，提取的基因组质量好，纯度高，污染少。

一种常绿木本植物基因组DNA的提取试剂盒，包括：漂洗液、裂解液、抽提液A、抽提液B、结合缓冲液、过柱缓冲液、洗脱缓冲液和吸附柱，还包括助研剂，所述助研剂包括不溶性交联聚乙烯吡咯烷酮、石英砂和抗坏血酸；所述漂洗液中包含Tris-HCl、EDTA-Na₂、NaCl、KAc、葡萄糖、聚乙烯吡咯烷酮、抗坏血酸和聚乙二醇；所述裂解液中包含CTAB、Tris-HCl、EDTA-Na₂、NaCl、山梨醇、硼砂、聚乙烯吡咯烷酮、抗坏血酸和蛋白酶K。

作为进一步的优化，所述助研剂中不溶性交联聚乙烯吡咯烷酮、石英砂和抗坏血酸的质量份数比为：5-20：5-20：1-10。

作为进一步的优化，所述漂洗液中包含0.05-0.1mol/L Tris-HCl，0.01-0.1mol/LEDTA-Na₂，0.1-1mol/L NaCl，0.5-1mol/L KAc，0.1-0.2mol/L葡萄糖，质量分数为1-6%的聚乙烯吡咯烷酮，质量分数为1-2%的抗坏血酸和体积分数为6-10%的聚乙二醇。

作为进一步的优化，所述裂解液中包含2-4×CTAB，0.1-0.3mol/L Tris-HCl，0.01-0.05mol/L EDTA-Na₂，1-2mol/L NaCl，0.3-0.5mol/L山梨醇， 0.01-0.05mol/L硼砂，质量分数为2-3%的聚乙烯吡咯烷酮，质量分数为1-2%的抗坏血酸和50-200μg/mL 蛋白酶K。