[发明专利]维生素C在制备培养基中的用途有效
申请号: | 201710576758.3 | 申请日: | 2017-07-14 |
公开(公告)号: | CN107460169B | 公开(公告)日: | 2020-12-11 |
发明(设计)人: | 潘光锦;黄可;张田;李宇航;廖宝剑;薛燕婷 | 申请(专利权)人: | 中国科学院广州生物医药与健康研究院 |
主分类号: | C12N5/0789 | 分类号: | C12N5/0789 |
代理公司: | 北京清亦华知识产权代理事务所(普通合伙) 11201 | 代理人: | 赵天月 |
地址: | 510530 广东省*** | 国省代码: | 广东;44 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 维生素 制备 培养基 中的 用途 | ||
本发明提出了维生素C在制备培养基中的用途,所述培养基用于促进胚胎干细胞或诱导多能干细胞造血分化。发明人通过实验发现,在人多能干细胞造血分化的单层分化培养体系中,添加维生素C可有效促进人的多能干细胞诱导分化成CD34+CD43+的HPC,维生素C对促进人多能干细胞(包括胚胎干细胞或诱导多能干细胞)的定向造血分化具有重要作用。
技术领域
本发明涉及生物领域,具体地,本发明涉及维生素C在制备培养基中的用途、促进胚胎干细胞或诱导多能干细胞造血分化的培养基以及促进胚胎干细胞或诱导多能干细胞造血分化的方法。
背景技术
造血干细胞是指一类具有自我更新能力,并能分化为各种血细胞(红细胞、白细胞和血小板)的细胞。由于其具有造血重建能力,在临床上造血干细胞被广泛用于治疗各种血液疾病,包括:遗传性疾病(如:地中海贫血症、镰刀形贫血症、再生障碍性贫血、范可尼贫血症等)以及非遗传性疾病(如:白血病等)。
临床上通常采用造血干细胞移植的方式治疗。造血干细胞移植是指通过向患者体内输注造血干细胞,从而重建患者正常造血与免疫系统,进而达到治疗疾病的方法。通常造血干细胞移植用以治疗造血功能异常、免疫功能缺陷、血液系统恶性肿瘤等,其疗效高、很多患者得到长生存期、乃至疾病得以根治。通常的造血干细胞来源有:外周血、骨髓、脐带血和胎盘。造血干细胞移植已经成功地被用于临床治疗系列白血病,但是由于其来源有限,且异体移植时,具有不可回避的配型问题,限制了其广泛地应用。
因而,寻找一种可以大量提供配型相合的,具有正常功能的造血干细胞来源,是目前造血干细胞领域最首要的任务。
而hESCs/hiPSCs(人类胚胎干细胞/人类诱导多能干细胞)的出现无疑为解决上述问题提供了一个可能的答案。由于hESCs/hiPSCs可以无限扩增,从而使得大量地从它们分化获得造血干/前体细胞(hematopoietic stem/progenitor cells,HS/PCs)成为可能;又如前所述,目前实验支持hiPSCs可以有效地回避免疫排斥反应的发生,因而可以回避配型问题。因此,有效地从hPSCs获得可用于移植的HS/PC,是目前干细胞和造血领域十分重要的问题。
目前,在体外诱导hPSCs分化产生HS/PS,主要包括三种方法:基质细胞共培养法;EB(Embryoid body;拟胚体)法和单层分化方法。
基质细胞共培养法是采用从造血微环境(Niche)中分离得到的基质细胞与hPSCs进行培养,在基质细胞和含血清培养基的共同作用下,将hPSCs分化成造血前体细胞(Hematopoietic progenitor cell;HPCs)。在这些基质细胞中比较有代表性的,目前为许多实验室采用的是OP9细胞,一种骨髓间充质细胞。该方法被报道有效地将hPSCs分化成CD34+CD43+CD45+/-的HPCs。
EB法是先将hPSCs制备成拟胚体(Embryoid body;EB),以模拟体内的三胚层发育的过程,然后再加入培养基,通常包含有特定的细胞因子,如BMP4,这些因子能促使细胞依次向中胚层和HPC方向分化。EB法可以在含血清的培养基中进行造血分化,也可在无血清的培养基中进行分化。
单层分化的方法是绕过EB形成的步骤,直接用含有生长因子的培养基,将贴壁生长的细胞分化成HPC。
然而,稳定高效的诱导分化体系仍需要进一步改进。
发明内容
本申请是基于发明人对以下事实和问题的发现和认识作出的:
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