[发明专利]肾移植术后急性排斥反应受者T细胞抗原受体图谱模型及其构建方法和构建系统

说明书

一种肾移植术后急性排斥反应受者T细胞抗原受体图谱模型及其构建方法和构建系统，其中，构建方法包括如下步骤：选取若干份相异人体的已经离体的肾移植术后急性排斥反应受者的外周血标本；分离T淋巴细胞；提取T淋巴细胞中的DNA；以DNA为模版，扩增出TCR的CDR3区，得到CDR3基因文库；采用高通量测序技术，对所述CDR3基因文库进行测序；对测序结果进行分析，构建肾移植术后急性排斥反应受者T细胞抗原受体图谱模型。通过对外周血中T细胞CDR3进行测序和分析，能够揭示急性排斥受者TCR CDR3的多样性，分析T淋巴细胞亚群中特异CDR3序列及TCR特征谱，评估急性排斥受者的免疫状态；发掘急性排斥发病过程的免疫组库改变，进一步研究肾移植术后急性排斥反应发病机制。

技术领域

本发明涉及生物医学技术领域，特别是涉及一种肾移植术后急性排斥反应受者T细胞抗原受体图谱模型及其构建方法和构建系统。

背景技术

肾小球滤过率(glomerμLar filtration rate，GFR)是反映肾功能的良好指标，它是指单位时间内两肾生成原尿的量，临床上通常将肾脏损伤或肾小球滤过率低于60ml/(min·1.73m²)即为诊断为慢性肾脏病(chronic kidney disease，CKD)。各种CKD持续进展会导致慢性肾衰竭(chronic renal failure，CRF)，目前我国CRF发病率大概为每一百万人口中有100人。当各种慢性肾脏疾病发展到终末阶段，患者肾小球滤过率低于15ml/(min·1.73m²)或者需要透析治疗时即为终末期肾病(End stage renal disease，ESRD)。根据流行病学资料显示，美国成年人2011年CKD发病率已经达到15.1％，中国目前的慢性肾脏病发病率为10.8％，随着病情的进展，肾功能逐渐衰竭，CKD患者最终将不可避免的发展成为终末期肾病(End stage renal disease，ESRD)。ESRD导致人类直接或间接死亡的数量相应的迅速增长，其防治已成为一个全球面临的严峻公共卫生难题。治疗ESRD，延缓甚至防止相关并发症的发生，如何提高该庞大群体的生活质量，已成为全世界共同关注的难题。肾脏移植是一种肾脏替代治疗的手段，肾移植可以明显提ESRD患者的生活水平。目前肾移植术后患者面临的主要问题有两个：排斥反应和感染。据统计，目前每年大概约5％的移植肾丢失(Cecka,J.,CLINICAL OUTCOME OF RENAL TRANSPLANTATION Factors InfluencingPatient and Graft Survival.RENAL TRANSPLANTATION:p.78:133)。排斥反应的发生是目前移植肾丢失的重要原因，其中急性排斥反应(acute rejection,AR)是各种排斥反应中最常见的。

器官移植排斥反应实质上是人体对异体器官的免疫反应，T细胞(T lymphocyte)在同种免疫反应中扮演者关键的起始者、介导者和效应者的“角色”，所以T细胞在同种异体移植物排斥反应中起至关重要的作用。急性排斥反应主要由细胞免疫反应造成，而晚期的急性排斥反应中有体液免疫的伴随。急性排斥反应发生时，受者体内会形成大量的细胞毒性T细胞直接对靶细胞造成杀伤，与此同时，T细胞辅助细胞活化产生各种细胞因子，帮助B细胞分化进而形成抗移植物抗体共同损伤移植物。

因此，需要更深层次的了解与肾移植术后急性排斥反应受者T细胞抗原受体的基因序列信息和多样性变化，因为这能更深层次的揭开T淋巴细胞参与肾移植术后急性排斥反应的机理，客观准确地评估肾移植术后急性排斥反应时免疫状态，进一步阐明膀胱癌的病因学及发病机制，进而为疾病预防、诊断、治疗和预后监测提供新的理论依据。

发明内容

基于此，有必要提供一种肾移植术后急性排斥反应受者T细胞抗原受体图谱模型的构建方法、构建系统及由构建方法制备得到的肾移植术后急性排斥反应受者T细胞抗原受体图谱模型。