[发明专利]一种蚯蚓中止咳祛痰抗炎抗微生物提取物的制备方法

权利要求书

1.一种提取物的制备方法，其特征在于，所述制备方法包括：

(一)粗提物的制备工艺

将等体积的pH4.8-5.4的0.1M NaAC缓冲液加入蚯蚓匀浆后，4℃提取2小时；

加入预冷丙酮，使丙酮的终浓度达15%，混匀，4℃放置1小时后，15000g离心15分钟；

取上清，加丙酮，使丙酮的终浓度达50%，混匀，4℃放置2小时后，15000g离心15分钟；

弃上清，加蒸馏水溶解沉淀，加入1M pH8.0的Tris-HCl缓冲液，使其终浓度为0.05M，混匀，4℃放置2小时后，15000g离心10分钟；

取上清，加预冷丙酮，使丙酮的终浓度达50%， 4℃放置1小时后，15000g离心10分钟；

弃上清，沉淀即为粗提物；

(二)粗提物的纯化工艺

准备样品：步骤(一)制备的粗提物用pH4.8—5.2的A液充分溶解后15000g离心10分钟；弃沉淀，上清用22微米的滤膜过滤后用于层析；

CM离子交换层析：用A液平衡3-5个柱体积后直接上样，上样结束后用A液继续冲3-5个柱体积；用20％的B液做第一次洗脱，洗脱后，用 30％的B液做第二次洗脱，收集30％的洗脱液，用于亲和层析；

亲和层析：

1)将30％的洗脱液用A液按照体积稀释5倍后用于亲和层析上样；

2)用A液平衡层析柱3-5个柱体积后直接上样；

3)上样结束后A液平衡层析柱3-5个柱体积，用30％的B液洗脱，所得样品浓缩后即为所述提取物；

其中,所述浓度百分数均为体积百分含量；所述A液为0.02M NaAC+0.02M NaCl；所述B液为0.02M NaAC+1M NaCl；所述20％的B液、30％的B液为将所述A液和B液混合后得混合液，B液在混合液中的体积百分含量为20％时为20％的B液，B液在混合液中的体积百分含量为30％时为30％的B液。

2.一种提取物，其特征在于，所述提取物采用权利要求1的制备方法获得。

3.权利要求1所述的提取物的制备方法或权利要求2所述的提取物的应用，其特征在于，所述应用包括在如下1)-4)中至少一种中的应用：

1)在制备祛痰、化痰和/或抗炎相关产品中的应用；

2)在制备抗呼吸道细菌相关产品中的应用；

3)在制备抗呼吸道病毒相关产品中的应用；

4)在制备具脱氧核糖核酸酶活性相关产品中的应用。