[发明专利]一种多功能载体的构建及使用方法有效
| 申请号： | 201710585288.7 | 申请日： | 2017-07-18 |
| 公开（公告）号： | CN107326043B | 公开（公告）日： | 2019-12-10 |
| 发明（设计）人： | 娜仁;杨春燕;张孟臣;刘兵强;赵青松;陈强 | 申请（专利权）人： | 河北省农林科学院粮油作物研究所 |
| 主分类号： | C12N15/82 | 分类号： | C12N15/82;C12N15/66;A01H5/00;A01H6/82 |
| 代理公司： | 11245 北京纪凯知识产权代理有限公司 | 代理人： | 关畅;张立娜 |
| 地址： | 050035 河北*** | 国省代码： | 河北;13 |
| 权利要求书： | 查看更多 | 说明书： | 查看更多 |
| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 多功能载体 标签序列 筛选 稳定转化植株 右边界序列 左边界序列 多个片段 简单经济 入门载体 农杆菌 构建 转化 应用 | ||
1.多功能载体，为含有DNA片段A和DNA片段B的环形载体；
所述DNA片段A自5’端到3’端依次含有attL1序列、IIs型限制性内切酶A的识别序列、筛选标签序列1、所述IIs型限制性内切酶A的识别序列、attL2序列；
所述DNA片段B自5’端到3’端依次含有T-DNA的右边界序列、大肠杆菌复制起点ColEori序列、筛选标签序列2、农杆菌复制起点pSa ori序列、T-DNA的左边界序列；
所述筛选标签序列1为CmR-ccdB；所述CmR-ccdB为自5’端到3’端依次含有CmR和ccdB的DNA片段；所述CmR表示氯霉素抗性基因，所述ccdB表示ccdB致死基因；
所述筛选标签序列2为壮观霉素抗性基因序列。
2.根据权利要求1所述的多功能载体，其特征在于：所述IIs型限制性内切酶A为BsaI。
3.根据权利要求1所述的多功能载体，其特征在于：所述attL1序列为序列表中序列1的第32-131位。
4.根据权利要求1所述的多功能载体，其特征在于：所述CmR-ccdB的序列为序列表中序列1的第312-1565位。
5.根据权利要求1所述的多功能载体，其特征在于：所述attL2序列为序列表中序列1的第1658-1757位。
6.根据权利要求1所述的多功能载体，其特征在于：所述壮观霉素抗性基因序列为序列表中序列1的第2723-3511位。
7.根据权利要求1所述的多功能载体，其特征在于：所述大肠杆菌复制起点ColE ori序列为序列表中序列1的第1949-2568位。
8.根据权利要求1所述的多功能载体，其特征在于：所述农杆菌复制起点pSa ori序列为序列表中序列1的第3856-4345位。
9.根据权利要求1所述的多功能载体，其特征在于：所述T-DNA的左边界序列和所述T-DNA的右边界序列分别为序列表中序列1的第4364-4387位和第1849-1873位。
10.根据权利要求1所述的多功能载体，其特征在于：在所述DNA片段A中，在所述attL1序列的上游还有用于测序的207F序列，在所述attL2序列的下游还有用于测序的207R序列。
11.根据权利要求10所述的多功能载体，其特征在于：所述207F序列为序列表中序列1的第1-25位；所述207R序列为序列表中序列1的第1781-1804位。
12.根据权利要求1所述的多功能载体，其特征在于：所述DNA片段A的序列为序列表中序列1的第1-1804位。
13.根据权利要求1所述的多功能载体，其特征在于：所述DNA片段B的序列为序列表中序列1的第1805-4469位。
14.根据权利要求12或13所述的多功能载体，其特征在于：所述多功能载体的序列为序列表中序列1。
15.含有权利要求1-14中任一所述多功能载体的重组菌或重组细胞。
16.权利要求1-14中任一所述多功能载体或权利要求15所述重组菌或重组细胞在基于Golden Gate技术构建双元目的克隆或Gateway入门克隆中的应用。
该专利技术资料仅供研究查看技术是否侵权等信息，商用须获得专利权人授权。该专利全部权利属于河北省农林科学院粮油作物研究所，未经河北省农林科学院粮油作物研究所许可，擅自商用是侵权行为。如果您想购买此专利、获得商业授权和技术合作，请联系【客服】
本文链接：http://www.vipzhuanli.com/pat/books/201710585288.7/1.html，转载请声明来源钻瓜专利网。
