[发明专利]抗独特型抗体检测方法

说明书

本发明属于生物技术领域，具体涉及一种抗独特型抗体检测方法。包括如下步骤：用包被缓冲液分别将样本溶液和阴性对照溶液稀释，得到样本稀释溶液和阴性对照稀释溶液；将酶标板上的微孔分为样本孔和阴性孔，并将样本稀释溶液和阴性对照稀释溶液分别加入到样本孔和阴性孔中静置处理后，倒去样本稀释溶液和阴性对照稀释溶液；在样本孔和阴性孔中依次加入封闭液进行封闭反应、标本稀释剂稀释的生物素‑单抗和链霉亲和素‑HRP进行连接反应、TMB底物显色液进行显色反应后，加入终止液，并用酶标仪测定所述样本孔和所述阴性孔中的光密度值确定样本溶液中是否存在所述单抗对应的抗独特性抗体。该方法步骤简单，提高了灵敏度，不会出现假阳性。

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体涉及一种抗独特型抗体检测方法。

背景技术

登革病毒广泛流行于全球的热带及亚热带地区，在我国主要流行于海南和广东地区，四种不同血清型的登革病毒可以共循环在同一地区。初次感染登革病毒的患者出现其体内产生的prM抗体能够增强异型病毒的感染，引起威胁生命的登革出血热(DHF)和登革休克(DSS)症状。

抗独特型抗体(anti-idiotype antibody；AId)是针对抗体分子V区上的特异抗原表位群(称为独特型)的抗抗体。AId与原来抗原的决定簇分子互为“内影像”关系，可模拟抗原结构和功能的作用，而可以作为一种新型疫苗。

目前，一般采用间接酶联免疫吸附试验(间接ELISA)检测抗独特型抗体，此类方法需要酶切抗体的Fab端与固相载体相连形成固相抗原，加入抗独特型抗体后加入一种酶标二抗进行显色。此类方法酶切抗体效率较低，酶切后需进行进一步纯化，步骤复杂；固相抗原与抗独特型抗体反应灵敏性较低；加入酶标二抗与未完全酶切的固相抗原吸附造成背景值较高，出现假阳性结果。

发明内容

本发明的目的在于克服现有技术的上述不足，提供一种抗独特型抗体检测方法，旨在解决现有抗独特型抗体检测灵敏度低、易出现假阳性的技术问题。

为实现上述发明目的，本发明采用的技术方案如下：

本发明提供一种抗独特型抗体检测方法，包括如下步骤：

用包被缓冲液分别将样本溶液和阴性对照溶液稀释，得到样本稀释溶液和阴性对照稀释溶液，所述阴性对照溶液含有同型对照抗体；

将酶标板上的微孔分为样本孔和阴性孔，并将所述样本稀释溶液和所述阴性对照稀释溶液分别加入到所述样本孔和所述阴性孔中静置处理后，倒去所述样本稀释溶液和所述阴性对照稀释溶液；

在所述样本孔和所述阴性孔中依次加入封闭液进行封闭反应、标本稀释剂稀释的生物素-单抗和链霉亲和素-HRP进行连接反应、TMB底物显色液进行显色反应后，加入终止液，并用酶标仪测定所述样本孔和所述阴性孔中的光密度值得OD_样本、OD_阴性对照；

根据所述光密度值分析：当OD_样本/OD_阴性对照≥2.1时，所述样本溶液中含有所述单抗对应的抗独特性抗体，当OD_样本/OD_阴性对照＜2.1时，所述样本溶液中不存在所述单抗对应的抗独特性抗体。

本发明提供的抗独特型抗体检测方法，直接将抗独特型抗体与固相载体相连形成固相抗原，然后加入生物素标记的抗体，链霉亲和素-HRP显色，建立生物素-链霉亲和素检测系统。与现有技术相比，本发明的抗独特型抗体检测方法步骤简单，不需要酶切去除抗体的Fc端，抗体-抗体结合反应特异性高，反应灵敏；此外，生物素-链霉亲和素检测系统扩大了检测信号，极大提高了检测浓度，省去了间接ELISA中的酶标检测二抗，消除了酶标二抗造成的假阳性。

附图说明

图1为本发明实施例抗独特型抗体检测方法的原理图。

具体实施方式