[发明专利]一种用于以实时荧光RT‑PCR检测样品中HIV‑1病毒的引物对和包含其的试剂盒

权利要求书

1.一种特异性结合HIV-1病毒的引物对，所述引物对由上游引物和下游引物组成，其特征在于，所述上游引物包含SEQ ID NO. 1所示的核苷酸序列，所述下游引物包含SEQ ID NO. 2所示的核苷酸序列：

SEQ ID NO. 1 GGGGTACAGTGCAGGGGAAAGAA；

SEQ ID NO. 2 TAAACCCGAAAATTTTGAATT；

优选的，所述上游引物的核苷酸序列如SEQ ID NO. 1所示，所述下游引物的核苷酸序列如SEQ ID NO. 2所示。

2.根据权利要求1所述的引物对，其特征在于，所述上游引物为荧光标记的引物，其中，所述上游引物的3’端标记有荧光报告基团，所述上游引物的5’端标记有荧光淬灭基团；或者所述上游引物的3’端标记有荧光淬灭基团，所述上游引物的5’端标记有荧光报告基团；

优选的，所述荧光报告基团为选自FAM、HEX、Texas Red、TET、JOE、TAMRA、ROX、LC Red610、LC Red640和CY5中的一种或多种；更优选为FAM；

优选的，所述荧光淬灭基团为选自BHQ1、Eclipse、BHQ3、BHQ2、Dabcyl和TAMRA中的一种或多种；更优选为BHQ1。

3. 一种特异性结合HIV-1病毒的引物对，所述引物对由上游引物和下游引物组成，其特征在于，所述上游引物包含SEQ ID NO. 3所示的核苷酸序列，所述下游引物包含SEQ ID NO. 2所示的核苷酸序列：

SEQ ID NO. 3 GACAGCAGTACAAATGGCAG；

优选的，所述上游引物的核苷酸序列如SEQ ID NO. 3所示，所述下游引物的核苷酸序列如SEQ ID NO. 2所示。

4.一种用于检测HIV-1病毒的探针，其特征在于，所述探针包含SEQ ID NO. 1所示的核苷酸序列；

优选的，所述探针的核苷酸序列如SEQ ID NO. 1所示；

还优选的，所述探针的3’端标记有荧光报告基团，所述荧光报告基团为选自FAM、HEX、Texas Red、TET、JOE、TAMRA、ROX、LC Red610、LC Red640和CY5中的一种，更优选为FAM；所述探针的5’端标记有荧光淬灭基团，所述荧光淬灭基团为选自BHQ1、Eclipse、BHQ3、BHQ2、Dabcyl和TAMRA中的一种或多种，更优选为BHQ1。

5.根据权利要求1至3中任一项所述的引物对，或者权利要求4所述的探针，其特征在于，所述HIV-1病毒为人源HIV病毒。

6.一种用于以实时荧光定量RT-PCR检测样品中HIV-1病毒的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括：

（1）权利要求1至3中任一项所述的引物对；

或者，所述试剂盒包括：

（1）权利要求3所述的引物对；

（2）权利要求4所述的探针。

7.根据权利要求6所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括以下中的一种或多种：

（A）dNTPs；

（B）PCR反应缓冲液；

（C）Mg²⁺；

（D）高保真DNA聚合酶或Taq酶；优选的，

（E）反转录酶，优选为AMV RTase；

优选的，所述试剂盒还包括以下中的一种或多种：

（F）样品RNA提取试剂；

（G）阴性质控品，为水，优选为DEPC水；和

（H）阳性质控品，为HIV-1病毒RNA片段，优选为1×10⁵拷贝/μl的HIV-1病毒RNA片段。

8.根据权利要求7所述的试剂盒，其特征在于，所述高保真DNA聚合酶是具有3’-5’外切酶活性的DNA聚合酶，为选自Pfu DNA聚合酶、PrimeSTAR^® HS DNA聚合酶、KOD 酶、Q5^TM超保真DNA聚合酶、Phi9DNA聚合酶和Klenow酶中的一种或多种；

优选的，所述样品为选自全血、血浆、淋巴细胞富集液、外周血淋巴细胞和滤纸干血斑中的一种或多种。