[发明专利]一种诱导SH-SY5Y细胞分化为多巴胺能神经元的方法

权利要求书

1.一种诱导SH-SY5Y细胞分化为多巴胺能神经元的方法，其特征在于，采用以下步骤：

（1）SH-SY5Y细胞培养：SH-SY5Y细胞在基础培养基中培养至一定融合度，进行消化，获得SH-SY5Y细胞的细胞悬液；

（2）诱导分化：将步骤（1）的细胞悬液铺板于培养皿以诱导培养基培养，获得多巴胺能

神经元；

所述诱导培养基中含诱导剂aFGF 50-150 ng/mL，TPA 50-150 nM，毛喉素25 μM，dbcAMP 50-150 μM，普拉克索10 μM。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤（2）的操作为将步骤（1）的细胞悬液加入基础培养基，铺板于培养皿，培养24h后更换为诱导培养基，继续培养，获得多巴胺能神经元。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，诱导培养基中含诱导剂aFGF 100 ng/mL，TPA 100 nM，毛喉素25 μM，dbcAMP 100 μM，普拉克索10 μM。

4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，诱导培养基成分为DMEM/F12培养基，还含有B27 1:50、FBS 1%、Antibiotic- Antimycotic mixture 1%、肝素钠5 μg/mL、左旋谷氨酰胺2 mM、aFGF 100 ng/mL、TPA 100 nM、毛喉素25 μM、dbcAMP 100 μM、普拉克索10 μM。

5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，基础培养基为含有15 %胎牛血清（FBS）和

1 % Antibiotic- Antimycotic mixture的DMEM/ F12培养基；所述融合度为80%-90%。

6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，每皿加入细胞终密度为0.5×10⁵-2×10⁵个/mL；诱导培养基加入量为3-6 mL/皿；培养的时间为4-11天。

7.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，每皿加入细胞终密度为1×10⁵个/mL；诱导培养基加入量为4 mL/皿；培养的时间为6-8天。

8.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，培养皿直径为60 mm；细胞培养时每48-72h更换全部诱导培养基一次。