[发明专利]依赖于混合抗体的循环肿瘤细胞分选和富集的方法

权利要求书

1.一种依赖于混合抗体进行临床样本中循环肿瘤细胞分选和富集的方法，其特征在于：

1)对依赖于抗原抗体相互作用进行癌细胞捕获的捕获装置或者载体进行修饰，使得整个捕获装置或者载体能够连接抗体；具体步骤为：在模板上利用磁控溅射的方法长上纳米氧化锌晶种层，将有晶种层的模板与作为生长液的溶液孵育得到纳米氧化锌层；生长液是硝酸锌和乌洛托品的混合溶液，生长液中两种溶质浓度都是10mM；进行等离子蚀刻，之后，将装置浸泡在体积分数为4%的（3-氨丙基）三甲氧基硅烷的乙醇溶液中，室温孵育1小时，清洗后将装置浸泡在乙腈配制的10 mM的N, N’-二琥珀酸亚胺碳酸酯溶液中，室温孵育10分钟，清洗，然后在装置中加入用磷酸缓冲液配制的10 µg/mL的neutravidin，室温孵育1小时，清洗；

2）之后加入用PBS配置的1%BSA稀释的10µg/mL 生物素连接的 anti-EpCAM抗体和anti-vimentin抗体，室温孵育1小时，清洗，每次清洗都是浸泡在PBS溶液中，放在摇床上5分钟；最后，用PBS配制的5%的BSA溶液进行封闭，室温1小时来减少血细胞非特异性粘附；所述的anti-EpCAM抗体和 anti-vimentin抗体的质量比为1:1；

3）利用捕获装置或者载体对临床血液样本进行循环肿瘤细胞捕获；完成临床样本中循环肿瘤细胞分选和富集；

所述的利用捕获装置或者载体对临床血液样本进行循环肿瘤细胞捕获具体为：

用PBS稀释按体积比1:1血液样本，再将淋巴细胞分离液和PBS稀释血溶液按体积比2:1的比率加入到细胞分离液的界面，离心，弃上清，悬浮在等体积的缓冲溶液中保存。